Question

在dna提取及纯化过程中应注意哪些问题

Answer 1

1、 裂解液要预热,以抑制DNase,加速蛋白变性,促进DNA溶解.
2、 酚一定要碱平衡.苯酚具有高度腐蚀性,飞溅到皮肤、粘膜和眼睛会造成损伤,因此应注意防护.氯仿易燃、易爆、易挥发,具有神经毒作用,操作时应注意防护.
3、 各操作步骤要轻柔,尽量减少DNA的人为降解.
4、 取各上清时,不应贪多,以防非核酸类成分干扰.
5、 异丙醇,乙醇.NaAc,KAc等要预冷,以减少DNA的降解,促进DNA与蛋白等的分相及DNA沉淀.
6、 提取DNA过程中所用到的试剂和器材要通过高压烤干等办法进行无核酸酶化处理.
7、 所有试剂均用高压灭菌双蒸水配制.