如何选择合适的蛋白含量测定方法
选择一种蛋白测定方法时，需要考虑两个重要因素：缓冲液的化学组成和检测的蛋白量。基于dford方法的QuickStartBradford和Bio_Rad蛋白测定灵敏度高，可以兼容糖、巯基乙醇、DTT等。而对于去污剂和NaOH这两种干扰Bradford测定的物质，DC蛋白测定却可以兼容。
如果蛋白是在loadingbuffer中，准备跑1D或2D电泳，或者刚从细胞裂解液中抽提出来，需要定量，那么RCDC蛋白测定更合适。
扩展资料：
常见测试方法：
QuickStartBradford 蛋白测定是一种简单、精确的蛋白浓度定量方法。现成的1倍浓度染料和7个预稀释浓度(0.125、0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0mg/ml)的蛋白标准品，让你拥有现成的检测工具。无需稀释标准品和染料，一步完成蛋白浓度定量。
Bio_Rad蛋白测定 也是一种简单的蛋白浓度测定方法。该方法适应标准浓度测定、低浓度微量测定，或96孔微孔板的快速测定。它的基本原理和流程和上面的QuickStartBradford都是一样的，不过要麻烦一点点。因为除了要稀释蛋白标准品，配成几个不同浓度之外，还要稀释染料，再过滤除去不溶颗粒。
QuickStartBradford和Bio_Rad蛋白测定方法的起源都是Bradford染料结合方法(Bradford1976)，该方法检测考马斯亮蓝G_250染料与蛋白结合时(主要结合碱性或芳香族氨基酸残基)的颜色变化。这种测定方法能定量多数蛋白或多肽(分子 量>3,000_5,000Da)，操作简单、速度快，灵敏度高，与一些还原剂(如DTT、巯基乙醇)兼容。
DC(DetergentCompatible)蛋白测定 是一种适用于含有去垢剂的蛋白样品比色测定方法。该方法类似于常规的Lowry测定方法(Lowryetal.1951)，但经过改良，节省了操作时间。DC蛋白测定只需要15分钟的温育过程，而且吸光值读数能保持2小时的稳定。
RCDC(ReducingagentCompatible&DetergentCompatible)蛋白测 定是一种适用于含还原剂和去垢剂的蛋白样品比色测定方法。
以Lowry方法(Lowryetal.1951)为基础的RCDC蛋白测定，具有原来DC蛋白测定的特点，并能与更多的试剂兼容，简化了复杂蛋白样品溶液的定量测定。吸光值至少稳定1小时。
除了与DC蛋白测定兼容的试剂外，RCDC蛋白测定还与以下试剂和缓冲液兼容：2%CHAPS、350mMDTT、0.1M EDTA 、Laemmli缓冲液、10%beta-巯基乙醇、ReadyPrep抽提试剂等。
参考资料来源：
