Question

细胞培养细胞总是污染，我该怎么办

Answer 1

外泌体多数情况下，细胞在体外培养需要血清，但血清中含有外泌体，为了避免血清污染细胞产生的外泌体，一般采用2种方法：①细胞培养前，通过100000??g超速离心过夜，去除血清外泌体。②可选择无血清培养基进行培养。宇玫博生物正在免费提供外泌体提取试剂盒，数量有限，先申请先得。

Answer 2

细胞培养最关键的还是操作，如果操作规范的话，污染几率是很小的，如果在培养的时候总是有黑色点状物质，可以考虑是不是细胞碎片或者血清里的蛋白质沉淀。

细胞污染可能原因：
1.天气太热，实验者在培养和接种或者换液时出汗（有空调稍好，但是手也出汗）。
2.培养间里可能暗藏污染原。
3.注意培养箱（这点最重要），仔细检查培养箱里的隔板的下面，有可能有霉菌斑。（我以前遇到过）
4.培养基污染多数是配置过程中造成的，仔细检查配置过程用到的器具。
5.血清过期一个月，如果保存的好应该没有问题，但是保存不好，新来的血清，用一次就可能污染。血清过期和污染是否有必然的联系不好说，我们觉得联系不大。

解决办法：
1.彻底清洁培养间，显微镜室。然后，紫外灯多照射一端时间消毒空气。
2.彻底清洁培养箱：（1）每个隔板仔细清洗，火烤。（2）培养箱大换水，换成新鲜干净的蒸馏水。（3）培养箱内壁用酒精棉球或者稀过氧乙酸认真擦洗。（4）紫外灯长时间照射（一天）。
3.实验用器械消毒：注意消毒时间和压力，有必要检查压力锅和校正压力表是否准确。
4.一次性手套在打开使用前一天放入无菌间照射消毒。
5.如果用双抗，应该现用现配。
6.注意过滤器的消毒灭菌。
7.经验告诉我们过期1年内的血清，只要保存妥当，其实血清的效价是不会降低的；还有刚购买的大规格的血清收到后，避免反复冻融，血清分装的时候要无菌分装，转入无菌间，在超净台内将血清分装入50-100ml血清瓶中封口，并于-20℃保存备用。分装时注意：① 预先要将血清轻轻摇动数周、混匀；② 用吸液管吹出血清时要注意：③ 不要吹出气泡，血清很粘稠，很容易产生气泡。如果产生气泡，则在酒精灯火焰上过一下。
8.检查培养间和超净台的通风过滤网，如果脏了，需要更换。

Answer 3

多看看别人怎么操作，多向其他人请教，自己试验多注意