Question

检验一种蛋白质在细胞中的定位实验方法及步骤 哪位博学的好心人帮忙解答一下，尽量详细，谢谢了。。。

做好有具体的实验操作，谢谢了，朋友们！

Answer 1

步骤
蛋白质原位杂交
步骤
1、提取纯化该蛋白（提取及纯化蛋白质的方法生化上有讲到）
2、制取该蛋白的特异性抗体 （将提取的蛋白质注入小鼠体内，使它产生免疫反应，产生特异性抗体，然后提取小鼠血清，血清中含有相应抗体）
3、将抗体与荧光分子（如GFP),辣根过氧化物酶（HRP）等标记物连接
4、标记抗体与组织切片标本孵育，抗体与细胞中相应抗原发生特异性结合，结合部位被标记物显示
5、在显微镜下观察到该肽或蛋白质的分布（抗体分子如与荧光分子连接，就在荧光显微镜下观察；如与HRP连接，则在光镜和电镜下进行观察）

Answer 2

可以使用原位杂交或者荧光蛋白的标记。
例如采用绿色荧光蛋白标记，可以将目标蛋白基因与绿色荧光蛋白基因融合，表达融合蛋白，然后根据绿色荧光蛋白产生的荧光，就可以标记目标蛋白在细胞中的定位。

Answer 3

弄个抗体去做一下IHC或者IF就可以的嘛