Question

pet28a是为包涵体表达而设计的吗

Answer 1

检测原核表达蛋白不需要将菌体超声波破碎的，原因如下：
1、如果是仅仅检测原核蛋白是否有表达，可以直接将菌体重悬于蒸馏水中，并使用SDS-PAGE的方法检测。
2、如果需要检测原核蛋白是否有可溶表达，则需要将菌体超声波破碎之后再检测是否有可溶表达。
3、所以检测原核表达蛋白不需要将菌体超声波破碎的。
超声法破碎细胞提蛋白质的具体步骤：
1、清洗后的的组织用搅切机切碎成小块，混悬在至少两倍体积的缓冲液内；
2、洗去培养液的细胞,混悬在至少两倍体积的缓冲液中；
3、将超声探头没入混悬液内，进行超声破碎，一般总超声时间约2min，分为几个周期，如4×30s，周期之间让样品在冰浴中冷却，总的过程不用加裂解液。