Question

Sanger测序中，DNA⽚段越短就越先检测到吗？

Answer 1

对，一代测序仪是一部精密的电泳仪和光学仪器。扩增后的末端带有ddNTP的片段越短，在电泳过程中跑的越快，越先被检测到。

每一种dNTPs和ddNTPs的相对浓度可以调整，使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物。它们具有共同的起始点，但终止在不同的的核苷酸上，可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段，凝胶处理后可用X-光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。

扩展资料：

Sanger法是根据核苷酸在某一固定的点开始，随机在某一个特定的碱基处终止，并且在每个碱基后面进行荧光标记，产生以A、T、C、G结束的四组不同长度的一系列核苷酸，在尿素变性的PAGE胶上电泳进行检测，从而获得可见的DNA碱基序列。

每一次序列测定由一套四个单独的反应构成，每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)，并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基团，使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、A、T或C处终止。

参考资料来源：百度百科-Sanger法测序