Question

何谓基因文库?何谓cDNA文库，有何优点?建库对于分离目的基因有何重要作用?

Answer 1

【答案】：基因文库是指包含某一生物基因组DNA片段的全部克隆。即将整个基因组DNA切成片段，并用合适的载体将全部DNA片段进行克隆。文库中每一个克隆只含基因组中某一特定的DNA片段。cDNA文库是指包含某一生物mRNA的全部cDNA克隆。cDNA文库中的每一个克隆只含一种mRNA信息。cDNA文库的优点：①文库中只含表达基因的cDNA，种类数比基因数少得多，较易筛选到目的基因克隆。②真核生物基因由于含有内含子，在原核生物细胞中不能直接表达。cDNA文库中筛选到cDNA克隆，只要附上原核生物的调节和控制序列，就能在原核细胞内表达。③由于cDNA不含真核生物基因的启动子和内含子，因而其DNA序列比基因短，可选用质粒或噬菌体载体作为克隆载体。微生物的单个基因只占基因组DNA的很小部分，要从中分离某一目的基因，就好比大海捞针，是一项十分艰巨的工作。建库后，利用标记的基因探针进行：DNA杂交，或者用抗体与表达蛋白进行免疫反应，或检测表达蛋白活性，从文库中较易筛选出含目的基因的克隆。