Question

PCR的产物跑琼脂糖凝胶电泳时，所有样都不出现条带，而是弥散状的，从投拖到尾

PCR的产物跑琼脂糖凝胶电泳时，所有样都不出现条带，而是弥散状的，从投拖到尾，而maker却是好的，说明不是电泳的问题，我把所有的酶，buffer,Mg+都换了一遍了还是找不到原因，结果照旧，重新合成了引物还是不行。同样的材料另外一对引物就能做出来。我都做了两个月了，大家帮帮忙吧~

Answer 1

“从头拖到尾，另外一对引物就能做出来”
说明不是引物之间形成二聚体，而是第一对引物的设计有问题（特异性很差）。如果一定要扩增那个区，建议引物的位置向两边放一放。如果你没有好的设计软件，建议到Primer3去试试（目前最好的免费引物设计）。
如果还是不行，把序列发给我，我帮你设计（我有专业软件，ABI primer express 3 和 Invitrogen Vector NTI 10)

Answer 2

可能就是引物特异性的问题，到网上再重新设计一个吧

Answer 3

看不懂废话毛

说明你的引物不是一般的差。第一步是提高退火温度试试，还是不行就只能按照一楼说的重新设计。

Answer 4

引物设计问题，引物特意性差，3‘端gc比太高，或者有引物落入了串联重复序列中。建议做一下primer－blast看一下是什么问题，然后重新设计