琼脂糖凝胶电泳中回收DNA
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根据你扩增的产物情况选择合适分辨率的凝胶浓度,比如:如果你的条带离引物二聚体很远,且比较单一,那可用1%~1.5%的胶即可,可稍微制厚一点,方便点样;如果你的条带只有一两百即离引物二聚体很紧或者非目标条带很多,那你需要浓度稍大一点的胶(3%~5%),电泳时间长一点,这样可使你的目的条带与非目的条带分开,方便切胶。
胶制好后即可点样,一般会使用宽一点的梳子可使上样量加大,提高回收浓度。点完样后即可开始电泳,电泳结束后,在紫外光仪下条带可显示出来,用薄的锋利的刀片快速将目标条带切下,切胶时要注意:尽量把目标条带切下,尽量包含较少的琼脂糖胶,并切忌将非目的条带切下,还要注意尽量让紫外线照射时间短(因为紫外照射会发生核苷酸变异,产生TT二聚体)。
目标条带切下后,可使用专门的琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(很多公司都有),按照试剂盒的说明书即可回收其中的DNA。
希望能帮到你,祝顺利!
胶制好后即可点样,一般会使用宽一点的梳子可使上样量加大,提高回收浓度。点完样后即可开始电泳,电泳结束后,在紫外光仪下条带可显示出来,用薄的锋利的刀片快速将目标条带切下,切胶时要注意:尽量把目标条带切下,尽量包含较少的琼脂糖胶,并切忌将非目的条带切下,还要注意尽量让紫外线照射时间短(因为紫外照射会发生核苷酸变异,产生TT二聚体)。
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