Question

为什么EcoR1和Nedl1两种酶切后电泳出现三条带，但是前面两条带亮度不一样，前面的亮，而后面的暗？

前面的是小片段，而后面的是大片段

Answer 1

如果切的是质粒的话,很有可能是三条带.被双酶切的质粒,会有一条载体(eg.4kb)一条外源片断(eg.1kb),两条带;被单酶切的质粒,也会有一条带(5kb).但是为什么有亮暗就不太明白了.
如果切的是PCR产物的话,应该先将PCR产物跑个电泳,看一下PCR的特异性好不好.也可以把酶切之前和之后的PCR产物一起电泳,看三条带是因为PCR产生的,还是由于酶切后产生的.如果是酶切后产生的,那就是你的用的酶对你的目的基因进行了切割.

追问

之前做过电泳，特异性非常好。是我想要的DNA片段。按说，前面的片段因为片段小，所以形成的带应该比后面的条带暗。但是这次不知是为甚么？

Answer 2

切的是PCR产物还是质粒啊 说的太模糊了吧 和亮暗没啥关系 几条带都正常 你在旁边跑一道没有切的做对照 把位置不一样的大条带回收下来就可以了