Question

高中生物~关于限制性核酸内切酶切点~请问这里②是什么意思，没有看的很明白，恳请帮忙讲解一下，非常感

高中生物~关于限制性核酸内切酶切点~请问这里②是什么意思，没有看的很明白，恳请帮忙讲解一下，非常感谢！

Answer 1

我在2010年的时候就有过相同的疑问，现在我可以把这个事情说得很清楚。
把质粒（或者单一识别位点）想象成一个由很多把锁围起来的圆圈，切点相当于锁孔，只有开锁（哪怕一把锁）才有可能把圆圈打开。把限制性内切酶想象成钥匙，每种钥匙都在圆圈上有与其配套的锁孔（每种内切酶都有它自己的切割位点/DNA识别序列）。
用内切酶去切割DNA的过程相当于用无数把不同的钥匙去试着解开这个圆圈。但是这样试效率太低了。于是我们就想，既然每种钥匙都在圆圈上有与其配套的锁孔，那么我们就只用一种钥匙（其实是两种甚至更多，但高中生物不作太多解释），然后复制成很多很多把相同的钥匙，用这些钥匙同时去试圆圈上的每一把锁。是不是高效得多？
背景说完了。②的意思就是说，我们要有足够多的锁孔种类，当一种钥匙坏了不能用的时候，另外一种钥匙可以作为备用，或者说当你想从6点钟方向解开时，如果只有3点钟方向的钥匙就没办法了。但每种锁孔我们要一个就行，因为我们的目的只是打开圆圈，锁孔太多不仅不容易发现，还容易把圆圈切割成太多片段，适得其反。
这应该足够解答你的问题了，实际的基因编辑远远比这个复杂得多，为什么每种锁孔要一个就行的原因也是要花很长时间去解释，你就先这样理解吧。祝好。
兽医Tony

Answer 2

如果有同种酶的多种识别位点容易发生自身环化，一般来说都会用不同酶切割目的基因这样既准确又不会自身环化

追答

比如说这段基因上有两个GAATTC的识别位点，就会被相应的酶切割两次，这样的话它自身容易环化到一起。因此我们一般选择有不同酶切位点的DNA

追问

不好意思追问下，请问您，
1.这个主要是为了准确的切下来需要的一小段基因，且不会被干扰对吗？
2. 一段基因被切时是需要在这段基因的首尾各切一刀吗？如果这样，就算有两个GAATTC的识别位点，会被相应的酶切割两次，也只能是这个接口连在一起，不能环化吧？
2. 是否同种酶的多种识别位点也是相同的碱基排序？就是说多识别位点是指酶自己能认读好几种碱基排序，还是这段基因上有好几个相同的碱基排序呢？

非常感谢！

追答

1没错就是要不受干扰的切下一段基因 2你要得到的基因两端的识别位点必须是不一样的，不然连接的时候就会自己跟自己形成环化，这里主要考虑的是你切所需要的基因时不能让它两端被同一种酶切断 3一种酶只能识别一种碱基序列，最好使用该片段上只有一个切点的酶，主要还是考虑相同切点会自身环化的问题