Question

质粒小量提取试剂盒常见问题与解析

Answer 1

质粒小量提取试剂盒常见从1～4mL菌液可以抽提到5～30µg的质粒，纯度高，OD260/OD280比值一般为1.8-2.0之间，质粒可直接用于PCR、酶切、转化测序和体外转录等后续实验。那么在实验过程中常见问题有哪些，下面跟我一起来看一下。

质粒小量提取试剂盒质粒得率低可能原因及解决办法：

1、菌体未活化，生长效率低，菌量少。需要活化菌种。

2、属于低拷贝质粒，增加菌液的量。

3、SolutionB裂解不充分，室温静置5min。

4、最后洗脱体积不够，洗脱液不少于50µL。

质粒小量提取试剂盒质粒纯度差可能原因：

1、SolutionA未加入RNaseA或加入RNaseA的SolutionA 未4℃保存。

2、加入SolutionB剧烈震荡，使得基因组断裂。

3、加入BufferN操作慢，形成微小沉淀，蛋白质无法被充分漂洗干净。

4、BufferW2未加入无水乙醇。

5、OD260/OD280比值一般在1.8-2.0之间，小于1.8可能有蛋白污染，大于2.0有部分降解或RNA污染。