Question

想请教用过Trizol法提取RNA，且结果比较理想的详细步骤及注意事项，是否可以共享一下，谢谢

Answer 1

我这边刚好在做，给你说下：
贴壁细胞的话去培养液，PBS洗一遍，加Trizol吹打下来。组织的话，在液氮里面捣碎，然后粉末放进Trizol,用超声粉碎器粉碎（超声每3秒，停10秒冷却，直到看不见组织碎末）。
（此步骤可以-80oC冻存，下面可以以后再做）
每1毫升Trizol加200微升氯仿（氯仿需饱和，可以在氯仿加一两公分高的水层，摇晃后静置分层，用时到下层取氯仿）
使出吃奶的劲把Trizol氯仿混合液摇成浑浊的乳液，每个样起码狂摇30秒（用手拿着，不能用漩涡混匀器）
静置3分钟，分层，进4度离心机，14000转15-30分钟。
取上层无色清澈液体，进新管。枪尖绝对不能贴壁，绝对不能碰触到极薄的乳白固态中间层，绝对不能吸到下层的红色液体。假定是1毫升Trizol200微升氯仿的量，你这里取个400-500微升就可以偷笑了，千万别贪心，造成污染。
加相等体积异丙醇，倒置数次混匀，不用太激烈。
（次步骤又可以-80oC冻存，下面可以以后再做）
进4度离心机，14000转10分钟，这个时候可以看见小沉淀物了，白色，看不见的话，产量就悲剧了。。。
弃上清，用1毫升75%酒精洗两次（加酒精，手摇看到沉淀物游来游去就可以了，然后离心弃上清）酒精尽量吸干净，但枪尖不要碰到沉淀物。
盖子打开，在通风橱里面晾干（一般5-10分钟。看到沉淀物从白色变半透明就赶快停了，干过头了等下难以溶解）
加干净的水（没有核酸酶的，你懂的）10-50微升依你产量而定啦。55oC水浴5-10分钟充分溶解。
大功告成，可以测浓度和各项指标，分装，冻存了。

如果需要用DNAse去DNA，加在异丙醇步骤前即可。