Question

western blot内参抗体actin为什么出了好几条带

开始做western blot，一切试剂、仪器都是临时买的或凑齐的，做了几次actin检验。第一次出了一条很弱的带；第二次动物血清干扰，都出了2条带，主带分子量很大；第三次没出；第四次则出了大小不一的几条带。问题出自哪呢？

Answer 1

首先要确定你的样品没有降解，基本上看带型可以确定，条带要干净，没有拖尾，其次是你的一抗，这个需要跟别个同学做的对比，这两个问题排除后主要就是你的抗体稀释度了，浓度过高，显影底物过强都会出现杂带，而杂带跟你每次操作包括洗脱的时间 孵育的时间的不同，都可能出现在不同的位置

Answer 2

条件没有优化好，比如抗体浓度太高，显影时间太长，然后产生的非特异条带。