Question

PCR结果没有条带，都是弥散的，这是为什么

前几次做的结果都挺好的，条带很清楚，亮度也可以，就是不太齐，但是最近几次几乎没有目的带，都是弥散的，从头到尾，我用的东西都是一样的，条件也没变，但是就是跑不出来，这是为什么？mark跑得很好，应该不是电泳的问题，哪位高人指点一下，谢谢

Answer 1

首先怀疑，特异性不好，解决办法：
1，可能是模板量过高，降低模板浓度10-1000倍；
2，适当提高退火温度1-3度，或者先用高于你以往退火温度的1-3度先p上5个循环，再用先前温度p剩余的循环（也就是在程序中多设置2步）；
3，稍降Mg离子浓度，如果以前加1.5ul的，试试1-1.2ul；
如果以上方案还不能解决，就要检查你的模板、引物和taq，重新提模板、重新稀释引物，以及用新的pcr试剂。
若有疑问，欢迎继续讨论，纯属手打，欢迎采纳，祝实验顺利！

Answer 2

Taq酶的问题可能性最大，也有可能是引物接触了RNA酶被降解了。

Answer 3

最好把你的pcr体系要加的都换一下，如果以前做的挺好，模板应该还好。