为什么DNA提取浓度低?
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DNA提取浓度低可能有以下原因
1)实验材料量太少,建议适当增加增加样本量;
2)样品裂解不充分。保持样本量不变的情况适当增加裂解液。使用液氮或匀浆器对样品进行研磨和匀浆,使其充分混匀,适当延长裂解时间;
3)提取材料质量不好。保证样品本身DNA含量,尽量选用富含核酸的组织或新鲜组织提取基因组DNA,样品采集后应尽快保存在 -80℃或液氮中,避免样品反复冻融或保存时间过久。若样品DNA含量较少,即使电泳检测不到明显的DNA条带,仍可尝试进行PCR检测,建议使用灵敏度高的酶进行扩增;
4)洗脱条件不合适。用超纯水洗脱前应检查其pH 值是否在7.0-8.5之间,如pH值小于7将明显影响洗脱效率,需调节后进行洗脱;
5)裂解液中加入无水乙醇后有沉淀析出。用移液枪吸打几次打散沉淀有利于提高产量。
6)DNA 断裂或降解。避免因移液枪反复吹吸或反复冻融样品造成的DNA损伤,及避免在操作过程中带入外源DNase污染
1)实验材料量太少,建议适当增加增加样本量;
2)样品裂解不充分。保持样本量不变的情况适当增加裂解液。使用液氮或匀浆器对样品进行研磨和匀浆,使其充分混匀,适当延长裂解时间;
3)提取材料质量不好。保证样品本身DNA含量,尽量选用富含核酸的组织或新鲜组织提取基因组DNA,样品采集后应尽快保存在 -80℃或液氮中,避免样品反复冻融或保存时间过久。若样品DNA含量较少,即使电泳检测不到明显的DNA条带,仍可尝试进行PCR检测,建议使用灵敏度高的酶进行扩增;
4)洗脱条件不合适。用超纯水洗脱前应检查其pH 值是否在7.0-8.5之间,如pH值小于7将明显影响洗脱效率,需调节后进行洗脱;
5)裂解液中加入无水乙醇后有沉淀析出。用移液枪吸打几次打散沉淀有利于提高产量。
6)DNA 断裂或降解。避免因移液枪反复吹吸或反复冻融样品造成的DNA损伤,及避免在操作过程中带入外源DNase污染
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中科雷鸣
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