如果质粒与目的基因结合的重组DNA和不含目的基因的质粒,同时在培养基中表达,怎样区分和筛选出目的基因?

法师药材店
2012-02-12 · TA获得超过1702个赞
知道小有建树答主
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一般有两种方法,一是用目的基因的特异性引物以重组质粒为模板,进行PCR扩增。看能否出现目的基因的扩增产物。还有一种是将纯化的质粒进行酶切,因为目的基因连接到载体质粒上时两边都带有人工添加的酶切位点,只要用这些内切酶进行酶切,然后看能否有目的基因的片段被切下来,则可以判定目的基因有没有插入。另外,在有些载体中(如T载体)目的基因是插入在某些标记基因内部的,这样如果标记基因表达正常则没有插入,如果标记基因不表达,那么则正常插入了。如T载体中的LacZ基因。
天空之KNIGHT
2012-02-12 · TA获得超过144个赞
知道答主
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那要看商品化的质粒上带有什么样的筛选序列了,如果质粒上带有lacZ的话可以做蓝白斑筛选(白色为有质粒插入) ,当然也可以像楼上说得那样做质粒抽提然后作特异性酶切验证,即切下的片断大小是不是和你插入的目的片段大小一致。 不管哪种方法关键还是要看质粒的说明书。
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jackieustc
2012-02-12 · 超过44用户采纳过TA的回答
知道小有建树答主
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PCR或者酶切验证
PCR扩增目的基因看看有没有插入
酶切特异位点看看目的基因有没有插入
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