菌落pcr一直p不出带
大肠杆菌转化后做菌落pcr一直p不出带是怎么回事？麻烦高手指教下pcr体系及反应时的程序，目的基因大概1000bp...
大肠杆菌转化后做菌落pcr一直p不出带是怎么回事？麻烦高手指教下pcr体系及反应时的程序，目的基因大概1000bp
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2个回答
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没连进去呗 可能是最初的PCR就没扩增出来你要的条带 调整下退火温度 或者直接连T载体测序 或者换对引物
追问
直接连T载体测序，这个怎么弄？引物是别人设计好的，所以很纠结。
我们拿菌液提质粒有，只是不很多。
追答
提质粒有说明不了问题啊 质粒自连了也会长的 就是直接拿PCR跑胶回收产物连接T载体 T载体没有的话测序公司应该有卖 或者就是按下面说的连接完酶切验证 还是应该把条件改改
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先做酶切，没有目标条带则没有连上，有目标条带则考虑PCR因素：引物、退火温度等
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