Question

如何提取细胞线粒体

现有传代培养的细胞，想进行线粒体和细胞质分离，请教具体步骤，尤其是破碎细胞的裂解液如何配置

Answer 1

提取新鲜心肌组织细胞内线粒体的方案：
心肌组织切碎后在4 ℃介质（0.25 mol/L蔗糖、10 mmol/L Tris-HCl pH7.4，0-4℃）中制备心肌组织匀浆。匀浆经750g、离心10 min后留上清，以9000 g离心20 min 后留沉淀，重新悬浮后以9000 g再离心20 min，弃上清得线粒体.全部操作于4 ℃进行。
培养细胞提取线粒体.细胞弃去培养液后，用细胞收集液作用2到3 min，用scraper,将细胞收集起来，6000 g离心15 min。弃上清，之后加细胞匀浆液，用匀浆器或手动匀浆管匀浆，将装有匀浆液的离心管配平后放入普通离心机，以2500 rpm，离心15 min,缓缓取上清液，移入高速离心管中，保存于有冰块的烧杯中.以17000 rpm离心20 min，弃上清，留取沉淀物。加入0．25mol/L蔗糖与0．003 mol/L氯化钙液l ml，用吸管吹打成悬液，以17000 rpm离心20 min，将上清吸入另一试管中，留取沉淀物，加入0.1ml 0．25mol/L蔗糖与0.003mol/L氯化钙溶液混匀成悬液.即得线粒体。

追问

感谢战友回答，还有几个问题想请教一下

1. 细胞收集液是TE么？

2. 细胞匀浆液是配置的么？
   

追答

是的

追问

请问细胞匀浆液是如何配置的呢

追答

取组织块(0.2g~1g)最少可到2~5mg,在冰冷的生理盐水中漂洗,除去血液,滤
纸拭干,称重,放入5或10ml的小烧杯内
2、用移液管量取预冷的匀浆介质(ph7.4,0.01mol/L Tris-HCL, 0.0001MO L/LEDTA-2Na,0.01mol/L蔗糖0.8%的氯化钠溶液)或者用0.86%冷生理盐水,匀浆介质或生理盐水的体积总量应该是组织块重量的9倍,用移液管或移液器取总量的2/3的匀浆介质或生理盐水于烧杯中,用眼科小剪尽快剪碎组织块(天然时操作要在冰水浴中进行,将盛有组织的小烧杯放入冰水中)。