Question

抗性基因或标记基因在质粒上的话，它怎么起到检验目的基因的作用？

大肠杆菌本身就有的质粒基因和导入的目的基因有什么必然联系吗？为什么本来质粒上就有的的基因可以筛选目的基因，还可以检验目的基因是否成功导入？

Answer 1

抗性基因或标记基因在质粒上是为了检验质粒是否被转入菌体中。
如果你的质粒是已经构建好，而且鉴定正确的，没有空载体质粒，那么，当你转化后，在筛选平板上转化（因为转化不是100%的效率，有些菌是没有质粒转入的），只有转入了该质粒的菌才能长起来，也就意味着这菌是带有你的目的基因。另外，抗性基因和标记基因（如营养缺陷基因）给予菌体以选择压力，有利于质粒在菌体内的大量扩增。
另一种情况，比如你做连接实验，把目的基因片段和酶切质粒连接，这时，连接效率更不会是100%，当你把连接产物转入感受态细菌，只要转入了该质粒（无论是空载体还是阳性载体），菌都能长起来，没转入的就长不起来，起到第一步筛选。要筛选你的阳性克隆，还需进一步检验，比如PCR或者提质粒酶切。
纯属手打，欢迎继续讨论，祝愉快！

Answer 2

没有必然联系，目的基因无法直接检测出是否成功导入，要看是否有相应翻译出的蛋白质。
标记基因就是为了更简便的检测出目的基因的导入，便于筛选、培养而插入的。

Answer 3

抗性基因是放在特定的条件下检测的、所以有就能活，没有就不能活。所以抗性基因是一种标记基因，有利于筛选含重组DNA的细胞。对于你说的质粒上的基因对于大肠杆菌，极少数可以存活吧。那种是发生了基因突变活基因重组。

Answer 4

质粒上既有抗性基因又有目的基因，抗性基因较容易检出，则可确定含目的基因的表达载体质粒已导入受体细胞。

追问

抗性基因（比如抗四环素基因）在质粒上本来就有，和导没导入目的基因没有关系。那无论是否导入目的基因都具有抗性，都可以抗四环素，那又是如何分辨是否导入目的基因的？