为什么pcr 引物设计出来，下游引物加上酶切位点和保护碱基后，有一个Tm值是负值呀？
还有，好多的Tm值都代表什么呢？引物Tm60多，二级结构的Tm达到40度有关系吗？G值有什么用...
还有，好多的Tm值都代表什么呢？引物Tm60多，二级结构的Tm达到40度有关系吗？G值有什么用
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Tm值本来就是人为定的一个预测值，三个Tm值代表的是不同的计算方法，常用的是第三种2*AT+4GC。看退火温度时，酶切位点和保护碱基一般是不考虑在内的，因为pcr扩增时这段序列一般是不跟模板结合的，所以计算时也不考虑，只是PCR条件可能需要一些优化。二级结构40度我不懂是什么，一般看二级结构只是主观的看看，太严重的就不要了。G值不知道指的是什么。
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