Question

问一下，就是，请问电泳DNA是否出现拖尾现象是要怎么判断的？

Answer 1

那琼脂糖凝胶电泳拖尾的几种情况及原因：

1. PCR产物出现拖尾的因素有很多，总结为一条，就是非特异性扩增过多。原因可能是：

（1） 模板不纯：解决方法，纯化模板

（2） Buffer不合适：解决方法，更换Buffer

（3） 退火温度偏低：解决方法，适当提高退火温度

（4） 酶量过多：解决方法，适量用酶，或调换另一种酶

（5） dNTP、Mg2+浓度偏高：解决方法，适当降低dNTP和镁离子的浓度

（6） 循环次数过多：解决方法，减少循环次数

（7） 模板量少或引物量过多：解决方法，增加模板量，减少引物的用量

2. 提质粒的时候经常有这种个现象，有可能是样品浓度过高了。这种情况简单，稀释一下就行了。

3. 提基因组DNA的时候也常出现拖尾，最可能的就是提的DNA中掺杂有蛋白质，蛋白质会拽DNA的泳动。所以一定要注意提取基因的操作，减少蛋白质等杂质的出现。

4. 样品破碎或是被降解

5. 存在RNA：DNA前面的一片一般都是未清除的RNA，经过纯化，RNAse处理，就没有了

6. 电泳体系的问题：观察你的marker是否也存在拖尾现象，作为对照

（1）电泳缓冲液TAE或者TBE的污染：。建议更换缓冲液。

（2）上样时样品漂了，建议增加上样缓冲液的用量，以及小心加样。

（3）电压太高：适当降低电压

（4）根据核酸片断大小，适当把加大凝胶浓度。凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。分离小于0.5kb 的DNA片段所需胶浓度是1.2-1.5%,
分离大于10kb的DNA分子所需胶浓度为0.3-0.7%, DNA片段大小间于两者之间则所需胶浓度为0.8-1.0%。

Answer 2

延长电泳时间，RNA拖尾会消失，DNA主带会变亮。
将电泳凝胶放置一段时间（如过夜），拖尾带会变暗甚至消失，而DNA主带会变亮（可能变模糊但不会消失）。
主带（长片段）是基因组DNA，拖尾带是残留的降解RNA条带。
同样条件提取的DNA（第六孔）残留的拖尾带是不连续的，集中在某一区域（可以解读为残留的降解RNA较少，如降解DNA的典型带型