Question

你怎么知道上样孔附进的电泳条带是蛋白污染或盐离子浓度过高造成的？有文献依据没？也可能是电泳时间短，可

Answer 1

电泳时间长短你可以和marker对比啊，如果marker迁移率过低确实可能是电泳时间短。此外，loading buffer中的溴酚蓝和二甲苯青等指示剂也能反映出电泳时间是否恰当。所以，对于一般熟手来说不存在电泳时间过短DNA未迁移的问题。在琼脂糖凝胶电泳中，一般1％的琼脂糖凝胶分辨线性DNA分子的上限约为20Kb，大于20kb的线性DNA分子迁移的位置和20kb的DNA分子迁移率是基本一致的（所以在DNA marker中，大分子量的条带一般都挨着比较近），所以在基因组DNA电泳中，基因组DNA的迁移率和一般20kb的marker条带是一致的，这样的话意味着不会因为DNA分子量过大而难以出孔。不出孔的亮带实质上还是核酸，只是一些物质阻碍了核酸出孔导致核酸挤压在点样孔里面。这种情况其实很好理解，一般来说PCR产物很少会有孔非常亮的情况，因为PCR体系一般污染物质非常少。而基因组DNA的电泳就会出现，因为经典的DNA提取方法并不能完全除掉蛋白质等大分子物质。