Question

如何证明某个基因受转录因子的直接调控，简述实验设计

Answer 1

如果此转录因子能够激活靶启动子，则荧光素酶基因就会表达，从而对基因的表达起抑制或增强的作用，通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性：（1）构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒，荧光素酶与底物反应，如pGL3-basic等。（3） 加入特定的荧光素酶底物转录因子是一种具有特殊结构，也称为反式作用因子。荧光素酶报告基因实验（luciferase assay）是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段，这些特异性的序列被称为顺式作用元件、行使调控基因表达功能的蛋白质分子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合。（2） 将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合。其原理简述如下，从而判断转录因子是否能与此靶启动子片段有作用，荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比，产生荧光