Question

提取血液的RNA怎么提取

Answer 1

1. 取新鲜的血液（紫管），加入3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10,000 rpm离心1分钟。

2. 彻底吸弃上清，收集白细胞沉淀。

3. 每100-200μl血液收集的白细胞沉淀加入1ml TRIzol。室温放置5min，使样品充分裂解。

4. 4℃12,000 rpm 离心10分钟，取上清（）。

5. 每1ml TRIzol加入200μl氯仿，剧烈振荡混匀后室温放置3-5 min，自然分相。

6. 4℃ 12,000rpm离心10-15min。样品会分成三层：黄色的有机相，中间层和无色的水相，RNA主要在水相中，把水相转移到新管中（小心吸取水相）

7. 在上清中加入等体积冰冷的异丙醇（），室温放置10-20min。

8. 4℃ 12,000 rpm离心10min，弃上清，RNA沉淀于管底。

9. RNA沉淀中加入1ml 75%乙醇（用RNase-free水配制，），温和振荡离心管，悬浮沉淀。

10. 4℃5,000-8,000 rpm离心1-2min，弃上清。

11. 室温放置1-2分钟晾干沉淀。 

12. 沉淀中加入50-100μl RNase-free水，轻弹管壁，以充分溶解RNA，-70℃保存。

13. 检测纯度和浓度（OD260/OD280在2.0左右）

Answer 2

1.10.5ml biog析出液加入59.5mL无水乙醇；18mL biog洗涤液加入42mL无水乙醇
2.取无RNA酶的15mL离心管，加入7.5mLbiog结合液，再加入2.5ml的血液，震荡混匀 15秒，室温放置5分钟，5,000 rpm 离心 3分钟。
3.彻底移去上清，加入625μLPBS，悬浮沉淀；加入2500 μLbiog裂解液，250μLbiog消化液，充分振荡混匀，56℃水浴10 分钟至细胞完全裂解。
4.加入6250ul配置好的析出液，轻轻颠倒混匀。
5.将吸附柱放入收集管内，将4813μL上述溶液转入吸附柱内，静置2分钟，5,000 rpm 离心2分钟，弃收集管内废液；
6.将吸附柱放回收集管内，将剩余4813μL溶液转移至吸附柱内，重复上一步骤。
7.将吸附柱放回收集管内，加5000 μL洗涤液至吸附柱内，5,000 rpm 离心1分钟，弃收集管内废液。
8.将吸附柱放回收集管内，5,000 rpm 离心2分钟，离去残留的洗涤液。
9.取出吸附柱，放入新的无RNA酶的15 mL 离心管内，加入250-400μL biog洗脱液，静置3 分钟，5,000 rpm离心2分钟，收集RNA溶液。提的RNA即可用于下一步实验或-20℃保存。