Question

Western blot 内参跑不齐怎么调整

Answer 1

第一，应该确认每个样品表达GAPDH的量一样，虽然是持家基因，本人觉得不同细菌可能表达量不一样，造成信号强弱不一样。可以通过考马斯亮蓝染色来确定上样量的差异，调整上样量一样再检测GAPDH。
第二，内参跑不齐。一般是跑胶时电流或电压太大。还有可能是样品中参杂着盐离子等其他物质也会造成跑不齐。
第三，PAGE胶的制备也很关键。看到条带信号连在一起，一方面因为胶不好，样品扩散，另一方面蛋白表达量 高，曝光时间长。
第四，转膜的效率会不会是不一致的，一抗、二抗的接合GAPDH不好。都有可能。
第五，本人在发文章做WB的时候也是做过很多次，每次都是不一样的结果。因为WB中间的步骤太多，影响因素很多，但是还是可以控制一下的。
第六，做过多次WB还是不行，建议新鲜制备蛋白样品。

Answer 2

内参，顾名思义就是内部参考。广义的内参可指任何机构搜集的供内部人员参考的信息资料。在我国，新闻内参特指新闻媒体向各级党政机关专门呈送的一种新闻报道，是新闻的一种特殊形式。与普通的新闻不同的是，新闻内参是一种不进行公开发布的报道。目前，我们所说的“内参”通常即指新闻内参。