Question

影响PCR扩增结果的因素

Answer 1

所谓的实时荧光定量 PCR 就是 通过对 PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。其原理是在实时荧光定量 PCR 反应中，引入了一种荧光化学物质，随着 PCR 反应的进行， PCR 反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图。 更专业的解答可联系广州双螺旋基因技术有限公司，产品服务：广州双螺旋基因技术有限公司专注于检测设备及配套试剂的研发、生产及销售，致力于为客户提供分子检测整体服务体系，目前已推出检测仪器与检测试剂等多种产品，涵盖水产养殖病害检测、致病微生物检测、物种鉴定等多个应用领域。谢谢！

Answer 2

1、引物：引物到用户手头前都是以干粉形式存在的，干粉很容易丢掉，引物溶解后可以测定一下OD，将所有引物的浓度调整到一致，对实验有一定帮助。

2、高温聚合酶：高温聚合酶是非常稳定的，除非有蛋白酶的污染。但是不同公司提供的酶扩增是有差异的，活性定量和标示未必相同。选用表现一贯稳定的酶，而不是最便宜的。

3、缓冲液：缓冲液一般不容易出问题，只是使用前需要彻底融化混匀使用。

4、温度：变性和退火温度是主要需要考虑的。

5、模板：PCR 的关键之一，模板不是越多越好。

6、dNTP: dNTP是PCR扩增体系中最不稳定的，反复冻融会使dNTP发生降解。

7、Mg2+:是TAQ活性所必须的，浓度过高过低对反应都有比较大的影响。过低，合成效率会下降，过高，非特异性会加大。