Question

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Animal experiments . Male C57BL/6J mice aged 5 weeks were obtained from Charles River Laboratory of Animal Science (Kanagawa, Japan ) and fed on a normal diet ( CRF-1, Charles River Laboratory of Animal Science , Kanagawa, Japan ) for 3 d to stabilize all the metabolic conditions . The animals were then provided with a high-fat diet ( D12451, Research Diets, CA,USA) for 4 weeks to induce obesity .The high-fat diet consisted of 44.9% fat , 35.1% carbohydrate, and 20.0% protein on a caloric basis . The mice ,each housed in an individual cage under a humidity of 55+10% were exposed to a 12-h light/dark cycle, maintained at 22+1 , and provided with water and the diet ad libitum . After 4 weeks , the mice were divided into 3 groups (n=6 each ). Two groups were administered with daily amounts of either 108 (B-3L group )or 109(B-3H group ) CFU of B. breve B-3 pre-mixed in the high-fat diet . The other group (control group ) successively received the high-fat diet supplemented skim milk as the vehicle . Each mouse was fed an equal amount of diet ranging from 2.7 to 3.0g/d during the feeding period . A bacterial cell suspension was confirmed by the culture method in the diet before administration .
The body weight was measured once a week . Fecal samples were collected on the last two days of week 8 to analyze fecal microbiota .After 8 weeks of a high-fat-diet supplemented with or without probiotics ,the mice were fasted for 16h and sacriticed under anesthesia with sodium pentobarbital solution (Dainippon Sumitomo pharma Co. Osaka, Japan ). Blood samples were collected via the inferior vena cava . Epididymal fat pad and liver were collected weighed and frozen in liquid nitrogen, and then kept in a deep freezer (-80)until analysis .the small intestine (ileum ) and large intestine were collected, kept in RNAlater (Applied Biosystems ,CA,USA) at 4 overnight and stored in a deep freezer (-80)until needed for analysis .The caecum was collected and weighed and caecal contents were submitted to microbiota analysis .All animal experiments were performed according to the guidelines for the care and use of laboratory animals approved by Morinaga Milk lndustry.

Answer 1

动物実験。 5周齢の雄性C57BL/6Jマウスはすべてを安定させるために3日间通常の饲料（CRF-1、动物科学、神奈川県、日本のチャールズ·リバー研究所）に动物科学（神奈川）とFRBのチャールズ·リバー研究所から入手した代谢条件。动物はその後、肥満を诱発するために4周间高脂肪食（D12451、リサーチダイエット、CA、USA）を用いて提供されていました。高脂肪食はカロリーで44.9％脂肪35.1％炭水化物、および20.0％のタンパク质から构成され基础。 55 10パーセントの湿度下で个々のケージに収容されたマウスでは、それぞれが、12时间の明/暗サイクルにさらされる22 1に维持され、水やダイエットの広告を自由に与えた。 4周间後、マウスを3群（n = 6个）に分けた。二つのグループは、108（B-3L群）または109の毎日の量は、（B-3Hグループ）B.ブレーベのCFUを投与したB-3は高脂肪食でのプレミックス。他の群（対照群）を顺次补充した高脂肪食は、车両としてスキムミルクを受け取った。各マウスを给饵期间中に2.7〜3.0グラム/ dに至る食の等しい量を供给した。细菌の细胞悬浊液は、投与前の食事に培养法により确认された。
体重は1周间に1回测定した。粪便サンプルは、粪便细菌丛を解析するために8周目の最後の2日に采取した。またはプロバイオティクスとなくこれを补充し、高脂肪食の8周间後に、マウスをペントバルビタールナトリウム溶液（大日本住友制薬麻酔下で16hとsacriticed绝食させた制薬株式会社大阪、日本）。血液サンプルは、下大静脉を介して収集した。精巣上体脂肪と肝臓の重量を测定し、液体窒素中で冻结した後、分析まで冷冻库（-80）に保管。小肠（回肠）、大肠を采取し、RNAlaterに保た（アプライドバイオシステムズ、CA、USA収集した4）一晩、分析のために必要になるまでディープフリーザー（-80）にstoredで。盲肠を収集し、秤量し、盲肠内容は微生物丛解析に提出しました。全ての动物実験は、実験室のケアと使用に関するガイドラインに従って行ったた森永ミルクlndustryによって承认された动物。

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Answer 2

动物実験。 5周齢の雄性C57BL/6Jマウスはすべてを安定させるために3日间通常の饲料（CRF-1、动物科学、神奈川県、日本のチャールズ·リバー研究所）に动物科学（神奈川）とFRBのチャールズ·リバー研究所から入手した代谢条件。动物はその後、肥満を诱発するために4周间高脂肪食（D12451、リサーチダイエット、CA、USA）を用いて提供されていました。高脂肪食はカロリーで44.9％脂肪35.1％炭水化物、および20.0％のタンパク质から构成され基础。 55 10パーセントの湿度下で个々のケージに収容されたマウスでは、それぞれが、12时间の明/暗サイクルにさらされる22 1に维持され、水やダイエットの広告を自由に与えた。 4周间後、マウスを3群（n = 6个）に分けた。二つのグループは、108（B-3L群）または109の毎日の量は、（B-3Hグループ）B.ブレーベのCFUを投与したB-3は高脂肪食でのプレミックス。他の群（対照群）を顺次补充した高脂肪食は、车両としてスキムミルクを受け取った。各マウスを给饵期间中に2.7〜3.0グラム/ dに至る食の等しい量を供给した。细菌の细胞悬浊液は、投与前の食事に培养法により确认された。
体重は1周间に1回测定した。粪便サンプルは、粪便细菌丛を解析するために8周目の最後の2日に采取した。またはプロバイオティクスとなくこれを补充し、高脂肪食の8周间後に、マウスをペントバルビタールナトリウム溶液（大日本住友制薬麻酔下で16hとsacriticed绝食させた制薬株式会社大阪、日本）。血液サンプルは、下大静脉を介して収集した。精巣上体脂肪と肝臓の重量を测定し、液体窒素中で冻结した後、分析まで冷冻库（-80）に保管。小肠（回肠）、大肠を采取し、RNAlaterに保た（アプライドバイオシステムズ、CA、USA収集した4）一晩、分析のために必要になるまでディープフリーザー（-80）にstoredで。盲肠を収集し、秤量し、盲肠内容は微生物丛解析に提出しました。全ての动物実験は、実験室のケアと使用に関するガイドラインに従って行ったた森永ミルクlndustryによって承认された动物。

Answer 3

动物実験。 5周齢の雄性C57BL/6Jマウスはすべてを安定させるために3日间通常の饲料（CRF-1、动物科学、神奈川県、日本のチャールズ·リバー研究所）に动物科学（神奈川）とFRBのチャールズ·リバー研究所から入手した代谢条件。动物はその後、肥満を诱発するために4周间高脂肪食（D12451、リサーチダイエット、CA、USA）を用いて提供されていました。高脂肪食はカロリーで44.9％脂肪35.1％炭水化物、および20.0％のタンパク质から构成され基础。 55 10パーセントの湿度下で个々のケージに収容されたマウスでは、それぞれが、12时间の明/暗サイクルにさらされる22 1に维持され、水やダイエットの広告を自由に与えた。 4周间後、マウスを3群（n = 6个）に分けた。二つのグループは、108（B-3L群）または109の毎日の量は、（B-3Hグループ）B.ブレーベのCFUを投与したB-3は高脂肪食でのプレミックス。他の群（対照群）を顺次补充した高脂肪食は、车両としてスキムミルクを受け取った。各マウスを给饵期间中に2.7〜3.0グラム/ dに至る食の等しい量を供给した。细菌の细胞悬浊液は、投与前の食事に培养法により确认された。
体重は1周间に1回测定した。粪便サンプルは、粪便细菌丛を解析するために8周目の最後の2日に采取した。またはプロバイオティクスとなくこれを补充し、高脂肪食の8周间後に、マウスをペントバルビタールナトリウム溶液（大日本住友制薬麻酔下で16hとsacriticed绝食させた制薬株式会社大阪、日本）。血液サンプルは、下大静脉を介して収集した。精巣上体脂肪と肝臓の重量を测定し、液体窒素中で冻结した後、分析まで冷冻库（-80）に保管。小肠（回肠）、大肠を采取し、RNAlaterに保た（アプライドバイオシステムズ、CA、USA収集した4）一晩、分析のために必要になるまでディープフリーザー（-80）にstoredで。盲肠を収集し、秤量し、盲肠内容は微生物丛解析に提出しました。全ての动物実験は、実験室のケアと使用に関するガイドラインに従って行ったた森永ミルクlndustryによって承认された动物。

Answer 4

动物実験。オスのマウス5周龄チャールズ川から动物科学実験室（神奈川、日本）と正常饲料授乳（crf-1、チャールズ川动物科学実験室、神奈川県、日本）3日の安定代谢条件。当时の动物を提供し、高脂肪食（d12451、食、カリフォルニア州、アメリカ）4周间の高脂肪食诱导肥満。44.9%などの35.1%の脂肪、炭水化物、タンパク质や热の基础の上で20%。マウス、インストールは一人笼湿度55+10%露出时间は12光/暗サイクル、を维持し22+1を提供したり、水や食事の広告を自由に食べる。4周间後、小さいネズミはランダムに分けて3组（各组6）。2组それぞれ毎日额を与えたり108（b-3l组）や109（b-3h集団）祖湾短い3混合高い脂の食。一方の组（対照组）相続いて高脂肪食として补充车両スキムミルク。すべてを同量の饮食2.7マウスからまでで3.0g / d授乳期间中。细菌の细胞悬浊育成の方法を确认した前の饮食の管理。
体重は周に一度测定。サンプルを収集日の最後2粪便8周间分析粪便の微生物。後8周间の高脂肪食补充あるいはプロバイオティクスない、マウス断食16とsacriticed麻酔でペンタバルビタールナトリウム溶液（日本の住友制薬会社大阪、日本）。血液サンプルを収集を通じて下静脉。副睾丸脂肪パッドと収集考量と液体窒素を保って冷冻し、そして深い冷冻（-80）まで分析。小肠（回肠）と大肠の収集、保存はrnalater（応用生物システム会社、カリフォルニア州、アメリカ）彻夜4や贮蔵深い冷冻（-80）まで分析が必要。盲肠には収集と考量と提出する微生物盲肠内容分析。すべての动物実験によって准则配虑と実験动物使用许可の森永牛乳工业