以第一轮产物为模板进行第二轮PCR,结果产物条带弥散是什么原因?

月令楼
2012-10-17 · TA获得超过942个赞
知道小有建树答主
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你第一轮PCR的结果是不是就有弥散或者是引物二聚体?如果是这样的话,原因有以下几个方面(排除酶以及其它试剂的问题):
1,引物设计不好,这种情况下肯定不行,换引物。
2,你的模板有问题,可能是浓度太低或者是杂质过多抑制了酶的活性,解决办法是换好的酶或者缓冲液,或者是(这个更靠谱))设计巢式引物做巢式PCR,如果引物设计的好,基本就ok了;如果还是做不出来,那就有可能是模板降解或者是你这个片段在模板上就是缺失了的。
智研科信
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匡雅霜Rn
2012-10-17 · TA获得超过1.4万个赞
知道大有可为答主
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弥散……怎么个弥散法?
最大的可能性是胶没配好,或者染料加多了(EB不会)
非特异性扩增的话,适当提高退火温度
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