为什么我用普通PCR扩出来的片段大小和用高保证酶扩出来的片段不一样长呢？ 10
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1，片段不一样长你是怎么知道的？如果是跑电泳的话，有差别是正常现象，即使是一样的片段不同次的电泳位置可能也有差别。和你的PCR体系也有关系，片段在不一样的体系里，也影响跑电泳的位置。
2，不一样的酶扩增到最后也不一样，有的酶会在片段最后面加polyA，有的就不加，长度也可能不一样。
2，不一样的酶扩增到最后也不一样，有的酶会在片段最后面加polyA，有的就不加，长度也可能不一样。
追问
我说具体一点吧，我的目的片段是900bp左右,用普通PCR扩出来的片段和900bp差不多，但是第二次我用高保真酶扩出来的确是1500-2000bp，都是和marker作比较的
追答
呵呵，那可能就有问题了，这个估计只能去把PCR产物测序才能知道了，要是高保真酶扩增出了的差距那么大，估计就是错的。
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这个应该是你引物特异性的问题，如果你不怕麻烦或者是真心想弄懂这个问题的话，你可以把两个PCR产物克隆到T载体中，然后测序！
追问
你遇到过这种情况没？这与引物有什么关系啊？我倒觉得是高保真酶的问题
追答
可以肯定的告诉你你用高保真的酶扩增的条带肯定是正确的，用TAQ酶扩增的条带不是正确的。如果是这样你的引物特异性不高
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跑电泳看的结果不是特别准确的，就算是同样的pcr也可能每次都不一样，最准确的就是找个生物公司测序
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