Question

质粒连接目的片段，菌液pcr后电泳有目的条带，为什么送菌液测序结果是空载体呢 ？

Answer 1

1、你的实验目的是什么？ 2、如果是克隆，连接T载体后不用酶切，直接转化菌落pcr检测有目的条带的话送样测序即可。 3、如果是做表达载体构建，pcr产物和质粒DNA酶切后与没有酶切的在同一块胶上电泳，如果两个酶切位点很近，几乎看不到被切下来的小片段条带（太小，早就跑出去了）。你要是怕酶切不完全就多稍微加点酶，切的时间长一点。 4、关于酶切产物有几条带视酶切效果而定，酶切完全则两条，一大一小（小的可能看不到，原因见3、）酶切不完全则三条带，一大一小及未切开的pcr产物；质粒的话可能还多一条环状分子和线状分子的区别。

Answer 2

1. 确定有目的条带么?

2. 如果确定连上了，可能就是挑菌的时候不是单菌落，重新挑，或者原点再取点，涂布或者划线。