转化后菌液pcr有目的条带，然后提质粒和双酶切验证。但是没有得到目的条带。
我想请教几个问题：1.提质粒最后一步用的是elutionbuffer而不是水，，这样有什么影响，如果有影响，现在如何补救？2.28a空质粒的位置应该跑在什么位置，提的质粒...
我想请教几个问题：1.提质粒最后一步用的是elution buffer而不是水，，这样有什么影响，如果有影响，现在如何补救？2.28a空质粒的位置应该跑在什么位置，提的质粒与空质粒的位置比较如何？3.双酶切验证的时候我只切了一个小时，有没有必要多切一些时间？谢谢大家了，做了两个月了都没做出来。请多指教！
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我觉得用elution buffer没太大的影响，如果你非要觉得不好的话，只能在转化一遍重新提质粒或者抽成干粉再加水。我们一般用水就行。实在不行去测序呀。
提的质粒和空质粒可以比较，如果你插入的基因足够大，实在不行多跑跑。然后看大小比较。
酶切的话还是要看你的酶的活性。要是快切酶的话只要五分钟，要是慢的话要三四个小时。（我用的是takara的） 是不是你酶切的量太少了，我一般50ul的体系要酶切1ug以上的，还要多跑跑，跑个十分钟以上吧。
我也做了个克隆用了很长时间，实在不行就买点贵的酶，能保证一次成功呀。
提的质粒和空质粒可以比较，如果你插入的基因足够大，实在不行多跑跑。然后看大小比较。
酶切的话还是要看你的酶的活性。要是快切酶的话只要五分钟，要是慢的话要三四个小时。（我用的是takara的） 是不是你酶切的量太少了，我一般50ul的体系要酶切1ug以上的，还要多跑跑，跑个十分钟以上吧。
我也做了个克隆用了很长时间，实在不行就买点贵的酶，能保证一次成功呀。
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