Question

SDS-PAGE检测蛋白质分子量的基本原理

蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移取决于它所带电荷以及分子大小和形状等因素。在聚丙烯酰胺系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠（SDS），大多数蛋白质能与SDS按一定比例结合，即每克蛋白质结合1.4g的SDS－复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而消除了蛋白质原有的电荷差别，使蛋白质分子电泳的迁移率主要取决于本身的分子量，而与蛋白质所带的电荷无关，在一定条件下，蛋白质的分子量的对数与电泳迁移率间呈负相关。

Answer 1

蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移取决于它所带电荷以及分子大小和形状等因素。在聚丙烯酰胺系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠（SDS），大多数蛋白质能与SDS按一定比例结合，即每克蛋白质结合1.4g的SDS－复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而消除了蛋白质原有的电荷差别，使蛋白质分子电泳的迁移率主要取决于本身的分子量，而与蛋白质所带的电荷无关，在一定条件下，蛋白质的分子量的对数与电泳迁移率间呈负相关。
操作步骤
1、凝胶制备：
用两块电泳玻璃板制成垂直板槽（不能漏胶）,垂直放置.将配制好的分离胶溶液倒入,滴加入无离子水,待凝胶聚集后,倒出无离子水,用吸水纸吸干,倒入浓缩胶,再插入梳子.
2、上样：
分别取样品若干ml于离心管中,按1/1～1/5比例加入5×样品缓冲液,再沸水浴中加热3～5min,取出待用.用微量注射器分别吸取不超过30μl不同浓度的标准蛋白样品和试验样品注入样品槽.点样结束后,调节电泳仪电流到10mA（2～3mA/em）,保持电流稳定不变,当溴酚蓝迁移到离分离胶底1～2cm时,即可停止电泳.
3、染色：
电泳完毕后,取出凝胶板,浸入染色液中,在37℃温箱中保温过夜.倒掉染色液,24h后,即可看到清晰的蛋白质条带.

Answer 2

你少说了一点。
聚丙烯酰胺凝胶能够形成大小均匀的网格状结构，这种网格状结构能够对通过其中的蛋白质分子起到阻碍作用，而阻碍的程度取决于分子的大小。因为与SDS结合之后，分子的大小是受其分子量决定的，因此能够区分出蛋白质的分子量

Answer 3

你不是自己说了很多了吗。在我的理解，本来蛋白质的分子量就很大，不可能测量得很精确，因为使用的标尺也是一些标准蛋白质制成的marker（ladder）。你所引用的不是就有“大多数蛋白质能与SDS按一定比例结合，即每克蛋白质结合1.4g的SDS－复合物都带上相同密度的负电荷”吗，1g蛋白质对应一定的负电荷，然后复合物电荷数目不同电泳迁移率不同，跟标准蛋白一比较，就测出蛋白质分子量了