Question

关于生物基因工程的问题

据报道，番茄红素具有一定防癌效果。科学家将含有酵母S－腺苷基蛋氨酸脱羧酶基因（简称S基因）cDNA片断导入普通番茄植株，培育了番茄红素高的新品种。

①获取cDNA片断的方法是
③为确保S基因在番茄中表达，在构建基因表达载体时应插入特定的

下面是我的问题：
第一问的答案是“逆转录法”那酶切法可以吗

第三问的答案是“启动子”那为什么不把终止子也写上去？

Answer 1

这位朋友，对于第一个问题，你首先得清楚什么是CDNA，cDNA是由mRNA通过逆转而得到的DNA片段。它和基因组DNA是有区别的，区别在于少了转录时被剪切掉了部分内含子之类的片段。所以在转基因的时候我们一般选择扩增CDNA片段，因为它是转录前被加工过的，去掉了许多不必要的片段，获得基因的关键部分。那么你酶切获得的DNA片段实际上是未加工过的，含有许多内含子，增强子等片段，并且你用酶切来获得的片段在酶切位置的精确性和单一性上是很难控制的。而通过逆转录PCR你直接就可准确得获得此基因的完整并且浓度很高的片段。

对于第二个问题在构建表达载体的时候一般都需要具有启动子和终止子，所以我觉得你的说法是正确的。

Answer 2

1. 用酶切法的前提是你已知目的基因在DNA的具体序列，这个好像不行吧，而且酶切也可能破坏目的基因。

2. 题目说的是插入，插入特定的启动子，启动子肯定对应终止子。另外答案如果你说是启动子和终止子之间肯定也不错，生物本来就是这样，填空题要节俭，相同的题在不同的试卷上出现答案意思一样但表达的方式可能不一样，平时的试卷就是这样，老师批改的时候会注意，高考应该不会

Answer 3

我不知道这是高中题还是大学题，暂且当做大学题了回答~

第一问的答案是“逆转录法”那酶切法可以吗？
不可以。获得cDNA的方法是，先提取细胞中的mRNA，然后逆转录成cDNA。由于真核DNA中有内含子，片段太大，表达困难，所以在获得该基因时，去除内含子，所以最好是mRNA逆转录而来的cDNA（不含内含子）。而且基因两端一般不会有合适的酶切位点给你酶切的。

第三问的答案是“启动子”那为什么不把终止子也写上去？
不需要加入终止子。首先反转录出来的cDNA自带有终止子，有些载体也自带终止子，即使没有终止子，关系也不大。
而基因在不同时空的特异性表达最主要的还是和启动子相关。表达外源基因时，必须构建相应的启动子，才能获得表达，不然也没用。

追问

我想再问你一个： 假设S基因的一条链A和T的总量为2400个,占该链碱基的60%,用PCR扩增该基因,该基因复制n次共要 dGTP 个

为什么是要求G有多少？？

追答

A和T占60%，那么G和C就占40%，G和C的含量是一样的，也就是说，G是20%，是A和T总量的1/3，就是800个。
复制N次，增加（2^N-1）条链，要求G800*（2^N-1）

追问

原题在这：
据报道，番茄红素具有一定防癌效果。科学家将含有酵母S－腺苷基蛋氨酸脱羧酶基因（简称S基因）cDNA片断导入普通番茄植株，培育了番茄红素高的新品种。

②假设S基因的一条链A和T的总量为2400个，占该链碱基的60%，用PCR扩增该基因，该基因复制n次共要dGTP 个。

不是求A的吗，怎么最后要求求G的含量呢？

追答

让你求什么就求什么，出题人也要借题发挥的呀

追问

没事了，谢谢了