PCR技术和DNA复制需要引物吗?如果需要,分别是什么?
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你做PCR是需要引物的,引物的用量、条数和种类根据你实验的目的而定,例如普通的扩增有上下游两条引物即可,有的多重PCR检测需要多对引物同时工作,有的PCR需要引物上引入酶切位点,有的PCR要求引物具有一定的随机性等等。
而DNA复制我不是太明白意思。是指从基因组上复制一段序列下来吗?还是指生物体内DNA分子复制过程?
如果你只是想利用PCR技术复制一段DNA片段的话,找出序列信息,利用DNAstar,primer premier等软件设计一对合适的引物,交给例如华大基因、上海生工等公司去合成就,引物拿到后用基因组DNA做模板,跑个PCR就可以了。
而如果你问的是在生物体内的DNA复制,那是需要RNA引物的。体内的双螺旋在DNA解旋酶的作用下打开后,形成两条单链。DNA聚合酶以此两条单链为模板,在每条单链的5‘端合成一小段RNA片段作为引物,接着往下复制。解旋酶揭开多少,就复制多少,每解开一段,就在这一段的开头加一个RNA引物。在此过程中就会看到RNA引物-DNA-RNA引物-DNA这样的重复,每一个重复就叫做一个冈崎片段。
原理如楼上所说。
而DNA复制我不是太明白意思。是指从基因组上复制一段序列下来吗?还是指生物体内DNA分子复制过程?
如果你只是想利用PCR技术复制一段DNA片段的话,找出序列信息,利用DNAstar,primer premier等软件设计一对合适的引物,交给例如华大基因、上海生工等公司去合成就,引物拿到后用基因组DNA做模板,跑个PCR就可以了。
而如果你问的是在生物体内的DNA复制,那是需要RNA引物的。体内的双螺旋在DNA解旋酶的作用下打开后,形成两条单链。DNA聚合酶以此两条单链为模板,在每条单链的5‘端合成一小段RNA片段作为引物,接着往下复制。解旋酶揭开多少,就复制多少,每解开一段,就在这一段的开头加一个RNA引物。在此过程中就会看到RNA引物-DNA-RNA引物-DNA这样的重复,每一个重复就叫做一个冈崎片段。
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PCR反应中有两条引物,即5′端引物和3′引物。设计引物时以一条DNA单链为基准(常以信息链为基准),5′端引物与位于待扩增片段5′端上游的一小段DNA序列相同;3′端引物与位于待扩增片段3′端的一小段DNA序列互补。
DNA的复制需要RNA引物,这是由DNA聚合酶和RNA聚合酶的特性决定的。DNA聚合酶不能从头合成DNA(需要引物DNA or RNA),因为DNA聚合酶具有高保真系统,这个系统要求,在新链的延伸过程中,只有新添加的碱基与模板链形成双螺旋才能继续链的延伸,否则延伸终止,启动切除修复机制,直至添加正确的碱基,也即是在DNA聚合酶的上游位置一定要互补形成双链(可以是RNA-DNA)才能继续下游DNA的合成,这是它的忠实性和高保真系统决定的。而RNA聚合酶可以从头合成RNA,合成的RNA游离在模板外,不需要与模板形成互补配对的双螺旋结构就能继续下游的合成。两种酶的不同机制决定了DNA复制时用的只能是RNA引物。
PCR反应中所用到的DNA引物,是用化学法人工合成的,与模板形成双链后在DNA聚合酶的作用下就可以继续链的延伸;而在体内,由于DNA聚合酶的忠实性,不能从头合成DNA,因此只能采用RNA引物来延伸了。
DNA的复制需要RNA引物,这是由DNA聚合酶和RNA聚合酶的特性决定的。DNA聚合酶不能从头合成DNA(需要引物DNA or RNA),因为DNA聚合酶具有高保真系统,这个系统要求,在新链的延伸过程中,只有新添加的碱基与模板链形成双螺旋才能继续链的延伸,否则延伸终止,启动切除修复机制,直至添加正确的碱基,也即是在DNA聚合酶的上游位置一定要互补形成双链(可以是RNA-DNA)才能继续下游DNA的合成,这是它的忠实性和高保真系统决定的。而RNA聚合酶可以从头合成RNA,合成的RNA游离在模板外,不需要与模板形成互补配对的双螺旋结构就能继续下游的合成。两种酶的不同机制决定了DNA复制时用的只能是RNA引物。
PCR反应中所用到的DNA引物,是用化学法人工合成的,与模板形成双链后在DNA聚合酶的作用下就可以继续链的延伸;而在体内,由于DNA聚合酶的忠实性,不能从头合成DNA,因此只能采用RNA引物来延伸了。
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