Question

产纤维素酶菌种的分离与筛选

Answer 1

产纤维素酶菌种的分离与筛选如下：

1、土样采集

土样的采集要选择富含纤维素的环境， 这是因为在纤维素含量丰富的环境， 通常会聚集较多的分解纤维素的微生物。

2、选择培养

选择培养需要的仪器：250mL锥形瓶、无菌称量瓶、药匙、1mL和10mL的移液管、天平、摇床、温度计等。培养基的制备：磷酸二氯钠0.1%，硫酸镁0.05%，硫酸铵1.5%，葡萄糖1.0%，玉米浆1.0%纤维素粉4%，PH值5.8~5.9，按比例制配培养基。在250mL锥形瓶中装入 30mL培养基。

用8层纱布做成瓶塞，将瓶口塞紧，再在瓶塞外包裹两层包装纸用线绳扎紧，在121℃下高压蒸汽灭菌20min。选择培养的操作：称取土样20g，在无菌条件下加入装有30mL培养基的摇瓶中。将摇瓶置于摇床上，在30℃下振荡培养1～2d，至培养基变混浊。

3、刚果红染色法分离

纤维素分解菌这一步所需要的仪器有：无菌培养皿、涂布器、1mL移液管，装有9mL无菌水的 20mL大试管，温箱等。培养基的制备：硫酸铵2g，硫酸镁0.5g，磷酸氢钾，氯化钠0.5g纤维素粉2g，刚果红0.4g琼脂22g水100ml。在500mL三角瓶中装入200mL培养基，在121℃下高压蒸汽灭菌20min。

倒平板操作

1、将灭菌后的固体培养基熔化，按无菌操作的要求，在无菌的培养皿中倒入15～20mL培养基，凝固后待用。制备菌悬液：按照稀释操作方法，将选择培养后的培养基进行等比稀释，稀释最大倍数至106。涂布平板：将稀释度为104～106的菌悬液各取0.1mL，滴加在平板培养基上，用涂布器将菌液涂布均匀，在30℃倒置培养，至菌落长出。

2、每个稀释度下需涂布 3 个平板， 并注意设置对照，在长出茵落的培养基上， 覆盖质量浓度为1mg／mI。的 CR溶液，10～15min后，倒去CR溶液，加入物质的量浓度为lmol／I。的NaCI溶液，15min后倒掉NaCl溶液，此时， 产生纤维素酶的茵落周围将会出现透明圈。