Question

关于ISSR引物

我现在打算做ISSR扩增，我有100个样品，但是不知道该购买多少引物，以及该买哪些序列的引物，希望大家能帮帮忙给个意见，谢谢。
我的100个是我提的DNA样品，不是引物。我还没买引物，你的50个引物是怎么确定的？为什么只用50个？

Answer 1

我就是做ISSR的。
你先要自己从那100个引物中选出一部分合成，不用全部合成。
我用50个引物用于筛选的。
发现引物都要含有G或C，不含G、C的Tm值都太低，而只含G、C的Tm都太高，也不能扩增出任何产物。我最后筛选出12个引物，多数是二核苷酸重复序列，个别是三核苷酸重复。且多数都含有兼并碱基的。

你可以参考别人文献中所使用的引物，但物种间是有差异的。

我说的100个引物是ISSR的通用的100个引物，是由UBC大学公布的，你看别人的文献中都是这么说的“从100个引物中选出多少个引物合成，用于筛选...”