Question

怎样用纸层析法测定胡萝卜素？

Answer 1

以丙酮和石油醚提取食物中的胡萝卜素及其他植物色素，以石油醚为展开剂进行纸层析，胡萝卜素极性最小，移动速度最快，从而与其他色素分开。

剪下含胡萝卜素的区带，洗脱后于450nm波长下进行比色测定。玻璃层析缸。分光光度计。旋转蒸发器，具150mL球形瓶。恒温水浴锅。皂化回流装置。点样器或微量注射器。滤纸。

试剂石油醚(沸程30～60℃)。丙酮。丙酮一石油醚混合液：3：7(WV)。无水硫酸钠(分析纯)。5％硫酸钠溶液(M／V)。1：1氢氧化钾溶液(M／、／r)。

无水乙醇：需脱醛处理，方法同比色法测定维生素A试剂。胡萝卜素标准溶液：取5mgp胡萝卜素标准品，溶于10mL三氯甲烷中，浓度约为500Ug。

扩展资料：

胡萝卜素被称作维生素A的前体，因为它们在体内可以转变成维生素A。其中最著名的是β胡萝卜素。胡萝卜素对人体的功能，主要通过维生素A来体现，比如负责暗光下视力和明暗变换视力，维持皮肤黏膜的完整性，通过调节细胞和体液免疫提高免疫功能， 参与精子和胚胎的发育。

此外，维生素A还与骨骼的形成有关。需要说明的是，从蔬菜水果中摄入过量的胡萝卜素会发生胡萝卜素过多症，表现为皮肤变黄，但对健康没有危害，停止摄入富含胡萝卜素的食物之后，黄色会逐渐消退。

Answer 2

楼主你好：
胡萝卜素是维生素A前体，可在人体内转变为维生素A。结构上分为旷，p和r胡萝卜素三种形式。天然胡萝卜素主要来源于植物，如胡萝卜、绿叶蔬菜等，其中以p胡萝卜素含量最高，活性最强。胡萝卜素本身是一种色素，在450：nm波长处有最大吸收，故只要能完全分离，便可定性和定量。但在植物体内，胡萝卜素经常与叶绿素、叶黄素等共存，在提取p胡萝卜素时，这些色素也能被有机溶剂提取，因此在测定前，必须将胡萝卜素与其他色素分开。常用的方法有纸层析、柱层析和薄层层析法。
胡萝卜素的测定
胡萝卜素是维生素A前体，可在人体内转变为维生素A。结构上分为旷，p和r胡萝卜素三种形式。天然胡萝卜素主要来源于植物，如胡萝卜、绿叶蔬菜等，其中以p胡萝卜素含量最高，活性最强。胡萝卜素本身是一种色素，在450：nm波长处有最大吸收，故只要能完全分离，便可定性和定量。但在植物体内，胡萝卜素经常与叶绿素、叶黄素等共存，在提取p胡萝卜素时，这些色素也能被有机溶剂提取，因此在测定前，必须将胡萝卜素与其他色素分开。常用的方法有纸层析、柱层析和薄层层析法。
纸层析法
1．原理
以丙酮和石油醚提取食物中的胡萝卜素及其他植物色素，以石油醚为展开剂进行纸层析，胡萝卜素极性最小，移动速度最快，从而与其他色素分开。剪下含胡萝卜素的区带，洗脱后于450 nm波长下进行比色测定。
2．仪器
①玻璃层析缸。
②分光光度计。
③旋转蒸发器，具150 mL球形瓶。
④恒温水浴锅。
⑤皂化回流装置。
⑥点样器或微量注射器。
⑦滤纸。
3．试剂
①石油醚(沸程30～60℃)。
②丙酮。
③丙酮一石油醚混合液：3：7(WV)。
④无水硫酸钠(分析纯)。
⑤5％硫酸钠溶液(M／V)。
⑥1：1氢氧化钾溶液(M／、／r)。
⑦无水乙醇：需脱醛处理，方法同比色法测定维生素A试剂。
⑧胡萝卜素标准溶液：取5 mg p胡萝卜素标准品，溶于10 mL三氯甲烷中，浓度约为500Ug�6�1mI标定：吸取标准溶液10肚I。，加正己烷3．00 mI。，混匀。用1 cm比色皿，以正己烷为空白，在450 nm波长下测定吸光值，平行测定3份，取平均值。
4．测定步骤
①样品提取与洗涤
a．粮食用水洗3次，置60℃烤箱中烤干，磨粉，贮于塑料瓶中，放一小包樟脑精，盖紧瓶塞保存，备用。
b．蔬菜与其他植物性食品取可食部分用水洗3次后，用纱布吸去水滴，打成匀浆。取适量磨细或打成匀浆的样品(含胡萝卜素20～80肛g)置于1。0 mI。带塞的锥形瓶中，加人20 mL丙酮、5 mI。石油醚，振摇1 min，静止5 min，将提取液转人盛有100 mL 5％硫酸钠溶液的分液漏斗中。之后再用10 mI，丙酮一石油醚混合溶液提取2～3次，直至提取液无色为止。将所有提取液并人分液漏斗中，静止分层，弃去下层水溶液，用15 mI。5％硫酸钠振摇洗涤数次，至水层不再混浊。
c．植物油和高脂肪样品：提取前需要进行皂化。取1～10 g样品，加乙醇30 mI。，l：1氢氧化钾10 mL，加热回流30 min，取出放人冰水中速冷。用石油醚提取皂化液，用水洗涤至中性。
②浓缩与定容：将石油醚提取液经无水硫酸钠(约5 g)滤人与旋转蒸发器配套的250～300 mI一球形蒸发瓶内，用约10 mL石油醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠3次，洗液并人蒸发瓶内，接旋转蒸发器，于55℃水浴中减压蒸馏回收石油醚。待瓶中剩下约2 mI。石油醚时，取下蒸发瓶，用氮气冲干。立即加入2．00 mI。石油醚定容。
③纸层析
a．点样：在图10一1的滤纸下端距底边4 cm处作一基线，在基线上取A、B、C、D四点。吸取O．100～O．4。0 mL(随胡萝卜素含量而定，估计吸光值在0．1～O．7之间)样品浓缩液在AB两点之间和CD两点之间迅速来回进行带状点样，一次点完。
b．展开：待纸上所点样液自然挥发至干后，将滤纸卷成圆筒状，将两边连接固定，基线处于纸筒底端。（更多详细咨询请参考国家标准物质网www.rmhot.com）置于预先用石油醚饱和过的层析缸内，上行展开(层析缸应事先用石油醚饱和，并且防止水分进入)。
c．洗脱：待胡萝卜素与其他色素完全分离后，取出滤纸，石油醚自然挥发至干。剪下位于展开剂前沿的胡萝卜素层析带，立即放人盛有5 mL石油醚的具塞试管中，用力振摇，使胡萝卜素完全溶入溶剂中
④比色测定：用1 cm比色皿，以石油醚调节零点，于450 nm波长下测定吸光度，以其值从标准曲线上查出相应伊胡萝卜素的含量。
⑤标准曲线的绘制取：p一胡萝卜素标准使用液(50弘g／mI。)1．00，2．OO，3．00，4．00，6．00，8．00 mI。，分别置于100 mL具塞锥形瓶内，按样品测定步骤进行提取、洗涤、纸层析等操作，点样体积为0．100 mL，标准曲线各点胡萝卜素含量依次为2．50、5．00、7．50、10．OO、15．00、20．00 pg。为测定低含量样品，可在0～2．50弘g加做几点。以胡萝卜素含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
5．计算
6．说明
①此法为国家标准方法，方法简便，色带清晰，最小检出限为O．11Ug。
②所有的操作步骤都需在避光条件下进行。
③浓缩提取液时，一定要防止蒸干，避免胡萝卜素在空气中氧化或因高温、紫外线直射等破坏。定容、点样、层析后剪样点等操作环节一定要迅速.

Answer 3

我觉得应该咋子说啊 我都不知道