Question

提取普通dna有线粒体dna吗

Answer 1

提取线粒体dna方法：（仅供参考）
（1）Triton法：　取10的7次方细胞沉淀,悬浮于5ml的Triton溶解液中.温和振荡片刻后,室温下放置10min.反应完毕的溶液以8000r/min离心1min,上清即为mtDNA.
（2）碱变性法：　取107细胞沉淀,依次加入溶液A(4℃)150Λl,冰浴中将沉淀吹打分散后加入300Λl溶液B(常温),将Eppendrof管缓慢颠倒10次,冰浴裂解变性6～8min,再加入225Λl溶液C(0～4℃),轻柔混匀,冰浴复性20～25min.反应完毕的溶液以10000rmin离心6min,4℃,取上清.1.3.3改进高盐沉淀法[3]　取107细胞沉淀,加入溶液5500Λl,混匀,2000r/min,10min,弃上清.沉淀加溶液5500Λl,混匀,3500r/min,10min,弃上清.沉淀加溶液950Λl,混匀后加入20mg/ml蛋白酶K50Λl和10%SDS120Λl,快速混匀.40℃过夜或50℃4h.加入300Λl饱和醋酸钠,混匀,轻摇15S.15000r/min,4℃,15min,取上清Eppendrof管中.取上清后步骤相同.上清中加入等体积酚∶氯仿∶异醇(25∶24∶1),温和振荡8min,10000r/min,10min4℃,取上层水相重复该过程抽提一次,轻取上层水相.加入2倍体积冰乙醇或等体积异丙醇,冰浴30min,15000r/min,10min,弃上清.用70%冰乙醇漂洗沉淀,15000rmin,2min,彻底去上清.沉淀于空气中自然部分干燥25min,加入适量RTE液溶解.贮于4℃