Question

260/230比值的含义是什么?

Answer 1

A260nm
是核酸最高吸收峰的吸收波长，最佳测量值的范围为0.1至1.0。如果不在此范围，稀释或浓缩样品，使之在此范围内；如果吸光度小于0.05，检查是否存 在操作因素（如移液不准确，样品内有悬浮物等）影响。

DNA样品的A260 吸光度值是否>0.1。（请注意，这个值跟仪器无关，核酸的吸光度必需大于0.1，其值才有效和可靠，因为样品中的杂质和颗粒这些不纯物的干扰通常 会对光有一定吸收，其值<0.1）。

A230nm
是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯DNA和 RNA的A260/A230比值为2.5。若比值小于2.0标明样品被碳水化合物（糖类）、盐类或有机溶剂污染，需要纯化样品。

A230产生负值主要是由 于在很低DNA 浓度的溶液中的一些其他成分的干扰所导致的。在下一个测定中，需要降低样品的稀释度，A230的负值会被校正。

用分光光度计进行核酸定量的注意事项如下

每种核酸的分子构成不一，换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积、空白液和样品液。

分光光度计仪器有一定的准确度和精确度。需要考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值，离子浓度等。在测试时，离子浓度太高，也会导致读数漂移，可以稀释样品。

核酸样品存在一些细小的颗粒，为了减少颗粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.1~1.5A。

样品不能存在气泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈；必须使用相同的比色杯测试空白液和样品，否则浓度差异太大；不能采用窗口磨损的比色杯；样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等。

以上内容参考 百度百科-分光光度计