Question

有一个最基本的PCR问题没有明白，引物到底是如何和模板链结合的

第一次自己进行引物设计，对于一个基本问题有点迷惑了，望得到大家帮助，引物是如何结合模板的，有人说是上游引物和模板链的5‘端序列相同，下游引物则是与模板链互补，我之前一直以为是两个引物都是该和模板链互补，然后再扩增出中间一段。那如果上游引物和模板链相同，那怎么连接呢，望得到解答，不胜感激

Answer 1

一个引物与靶区域一端的一条DNA模板链互补。

引物为人工合成的两段寡核苷酸序列，一个引物与靶区域一端的一条DNA模板链互补，另一个引物与靶区域另一端的另一条DNA模板链互补，其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点，核酸聚合酶可由其3端开始合成新的核酸链。

PCR引物设计的目的是找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。如前述，引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。对引物的设计不可能有一种包罗万象的规则确保PCR的成功，但遵循某些原则，则有助于引物的设计。

扩展资料：

PCR扩增的作用机制：

1、在标准反应中采用三温度点法，双链DNA在90～95℃变性，迅速冷却至40 ～60℃，引物退火并结合到靶序列上，快速升温至70～75℃，在Taq DNA聚合酶的作用下，使引物链沿模板延伸。

2、93℃～94℃1min足以使模板DNA变性，若低于93℃则 需延长时间，但温度不能过高，因为高温环境对酶的活性有影响。若不能使靶基因模板或PCR产物完全变性，就会导致PCR失败。

3、变性后温度快速冷却至40℃～60℃，可使引物和模板发生结合。由于模板DNA 比引物复杂得多，引物和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞。

参考资料来源：百度百科-引物

Answer 2

首先你要明白，DNA合成需要引物3'端的羟基，合成方向是5‘－3’。

如果非要指明模版链和互补链，那么上游引物是和互补链3‘配对，这样合成方向才是5’－3‘

而下游引物和模版的3’端互补配对，合成方向5－3‘

结果是，一个模版复制出2个子代，引物之间的序列是相同的，半保留复制，母代的DNA双链被分开。理论上类似裂变反应，所以PCR才能在30－40循环后将微量的序列放大百万倍

Answer 3

对于这个问题，初学者最好自己用笔在纸上画，一会儿就能明白。注意画的时候要务必把模板链、互补链以及上下游引物的3‘和5’端都标示清楚。

Answer 4

第一链合成后hl将mRNA水解nrvz其水解后的片段充当了第二链的引物