Question

提rna纯度和浓度不行,怎么回事?

Answer 1

具体提什么物种 什么部位 我们这儿专门做分子生物学的相关产品 看看我们的这能不能帮上你的忙
有个客户用RN3802提番茄的，开始试提还可以达到100ng左右，可昨天真正实验几个样品都在30ng左右，都是新鲜的果实，只是成熟度可能不一样，所以请问能帮忙找找原因，有更好的试剂盒推荐吗？或者怎样优化下条件呢？

1. 30ng已经足够做下游的反转录和荧光定量PCR了，不是每个样品，每个种类都要提取最高的量的,每种样品不同，甚至同一种样品的不同的部位，提取的产量浓度差10倍都是常见的现象，比如黑加仑的叶片产量大约是500ng/UL，但是根的产量连30ng都不一定有，同一个植株的不同部位，所有的试剂盒，操作一样的情况下。比如茶梅花瓣可以浓度超过2000ng/UL。所以，浓度提取够你完成实验就行，不需要每种样品，每种部位都去追求高浓度。

看见了北京林业大学这个提取杨树叶片，芽等RNA的客户了？ 浓度是20-70ng/UL， 用于一般反转录的话，正常都可以，你提取了这个浓度，把你实验做完了，就完了。根据我们的经验，这个浓度足够你做完实验了。当然同时截图了另外两个，一个是客户用我们盒子提取茶梅花瓣的RNA（有发表文章的原文），浓度超过2000ng/UL，一个是油茶叶片RNA，浓度是165ng/ul。说明不同的样品之间浓度差距就是很大。

当然你碰到确实有客户的实验，比如建库等实验需求，需要浓度高的话。 我们当然也有办法
总结起来，还没有我们这个RNA提取技术第一的公司搞不定的， 有3种解决方法：

1.尝试强力裂解液CLB,并且加大处理量，比如加大10倍处理量，然后用几个基因组先清除后，把所有的上清加到一个吸附柱上去，就能提高浓度。
例子：比如北京药用植物研究所，植物的根，块根产量很低。
Jay 22:39:05
今天用了1g根 加3ml CLB 150ul ME
后面把上清过两个gDNA柱子 （絮状沉淀扔掉了）
过一个RA柱子
50ul洗脱
浓度 205ng/ul
260/280 2.08；

看见了吧？ 根的浓度比较低，所有，加大10倍处理量，用了1克的根，然后用了3ml CLB， 然后过2个基因组DNA清除柱子后，把所有的洗脱下来的RNA，上到一个RNA柱子上去，浓度提高到了205ng/UL

2. 买我们的RNA大量提取试剂盒，一次可以处理1-2克的量。将来乙醇沉淀浓缩一下，或者冻干浓缩一下。

3. 用小量提取多处理几个样品，合并后浓缩一下，或者冻干浓缩一下。

4. 我们的RNA提取试剂盒纯度很高，不残留DNA，不残留杂质，所以，很多别人的测风光光度计测量的浓度高，不一定是真的浓度高，而是残留的杂质和残留的DNA导致的吸光值。