高中生物必修一检测蛋白质的实验
folin—酚试剂法。
此法的显色原理与双缩脲方法是相同的,只是加入了第二种试剂,即folin-酚试剂,以增加显色量,从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这两种显色反应产生深兰色的原因是在碱性条件下,蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。
folin-酚试剂中的磷钼酸盐-磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原,产生深兰色(钼兰和钨兰的混合物)。在一定的条件下,兰色深度与蛋白的量成正比。
扩展资料:
注意事项:
样品应是均匀的,若是固体样品应事先研细过筛,液体样要混合均匀。
样品放入凯氏烧瓶时,不要黏附瓶颈上,万一黏附可用少量水缓慢冲下,以免被检样消化不完全,使结果偏低。
如果称1g以上的样品,就需要K氏烧瓶最小500ml,800~1000ml的更好,这样的K氏烧瓶对于缩短氨化时间,加热的均匀性和完全氨化效果最好。
向蒸馏瓶中加入浓碱时,往往出现褐色沉淀。这时由于分解促进剂与加入的硫酸铜反应,生成氢氧化铜,经加热后又分解生成氧化铜的沉淀,有时Cu离子与氨作用生成深兰色的络合物。
参考资料来源:百度百科-蛋白质分析实验技术指南
1.实验原理:蛋白质与双缩脲试剂发生作用,产生紫色反应。
2.实验材料:黄豆
3.操作方法:
1)制备组织样液:浸泡、去皮研磨、过滤。
2)鉴定:加样液约2ml于试管中,加入双缩脲试剂A,摇匀;再加入双缩脲试剂B液3~4滴,摇匀,溶液变紫色。
①向试管内注入2ml蛋清稀释液
②先向试管内注入2ml双缩脲试剂A,摇匀
③在向试管内注入4或5滴双缩脲试剂B,摇匀
④观察试管中出现的颜色变化:溶液有紫色复合物(复合物是指由两种或两种以上不同物质所形成的结合体,当复合物表现与其中各单一组分所具有的性质迥异的化学性质)出现
※注意事项:
在蛋白质的检测实验中,最好选用富含蛋白质的生物组织,植物材料常用的是大豆,动物材料常用的是鸡蛋蛋清,且所选材料应是无色或白色,以免影响实验结果的观察。
双缩脲试剂有0.1g/mlNaOH溶液和0.01g/mlCuSO4溶液组成,使用时先加2ml0.1g/mlNaOH溶液,然后滴加0.01g/mlCuSO4溶液4或5滴。【先加A后加B,B不能过量(过量会导致溶液成蓝色,而掩盖实验生成的紫色)】
蛋白质鉴定不需要加热;若材料用的是鸡蛋清,必须充分进行稀释,否则反应后的产物会粘试管壁上,使反应不彻底。