为什么提取RNA的浓度总是太低
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rna．提取
称取鲜酵母 159或干酵母粉 2.5g,倒入 100ml三角瓶中,加 NaCl 2.5g,水25ml,搅拌均匀,置于沸水浴中提取lh.
2．分离
将上述提取液用自来水冷却后,装入大离心管内,以4000r／min离心10min,使提取液与菌体残渣等分离.
3．沉淀RNA
将离心得到的上清液倾于50ml烧杯内,并置入放有冰块的250ml烧杯中冷却．待冷至10℃以下时,用6mol／L HCI 小心地调节pH值至2.0～2.5（注意严格控制pH）.调好后继续于冰水中静置10min,使沉淀充分,颗粒变大.
4．洗涤和抽滤
上述悬浮液以 4000r／min离心 10min,得到 RNA沉淀.将沉淀物放在 10ml小烧杯内,用95％的乙醇 5～10ml充分搅拌洗涤,然后在布氏漏斗上用射水泵抽气过滤,再用 95％乙醇5～10ml淋洗 3次.
5．干燥
从布氏漏斗上取下沉淀物,放在6cm表面皿上,铺成薄层,置于80℃烘箱内干燥.将干燥后的RNA制品称重,存放于干燥器内.
应该是这里的某个步骤错了吧!
称取鲜酵母 159或干酵母粉 2.5g,倒入 100ml三角瓶中,加 NaCl 2.5g,水25ml,搅拌均匀,置于沸水浴中提取lh.
2．分离
将上述提取液用自来水冷却后,装入大离心管内,以4000r／min离心10min,使提取液与菌体残渣等分离.
3．沉淀RNA
将离心得到的上清液倾于50ml烧杯内,并置入放有冰块的250ml烧杯中冷却．待冷至10℃以下时,用6mol／L HCI 小心地调节pH值至2.0～2.5（注意严格控制pH）.调好后继续于冰水中静置10min,使沉淀充分,颗粒变大.
4．洗涤和抽滤
上述悬浮液以 4000r／min离心 10min,得到 RNA沉淀.将沉淀物放在 10ml小烧杯内,用95％的乙醇 5～10ml充分搅拌洗涤,然后在布氏漏斗上用射水泵抽气过滤,再用 95％乙醇5～10ml淋洗 3次.
5．干燥
从布氏漏斗上取下沉淀物,放在6cm表面皿上,铺成薄层,置于80℃烘箱内干燥.将干燥后的RNA制品称重,存放于干燥器内.
应该是这里的某个步骤错了吧!
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上海宇玫博生物科技有限公司
2018-11-07 广告
一、超速离心法，这是目前外泌体提取常用的方法 。此种方法得到的外泌体量多，但是纯度不足，电镜鉴定时发现外泌体聚集成块， 由于微泡和外泌体没有统一的鉴定标准，也有一些研究认为此种 方法得到的是微泡不是外泌体 。二、过滤离心， 这种操作简单、省...
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