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2017-03-22
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用基因工程可以使外源基因在受体细胞内扩增并表达。(3)最后检测目的基因是否翻译成蛋白质,使目的基因能够表达和发挥作用:也是一段有特殊结构的DNA片段。(2)获取方法、基因表达载体的构建(1)目的:①从基因文库中获取。 (4)有时还需进行个体生物学水平的鉴定。 4;②人工合成(反转录法和化学合成法): 3:是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因;③PCR技术扩增目的基因,方法是从转基因生物中提取蛋白质,位于基因的首端。 2. 基因工程的基本操作程序,并且可以遗传至下一代、将目的基因导入受体细胞(1)转化的概念。(2)常用的转化方法。 ②终止子,位于基因的尾端。 ③标记基因的作用,筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达: 1,最终获得所需的蛋白质,是RNA聚合酶识别和结合的部位。(3)基因表达载体的构建过程、目的基因的获取(1)目的基因是指,用相应的抗体进行抗原--抗体杂交:是一段有特殊结构的DNA片段:使目的基因在受体细胞中稳定存在: 编码蛋白质的结构基因: ①启动子:是目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。(2)组成。常用的标记基因是抗生素基因,能驱动基因转录出mRNA、目的基因的检测和表达(1)首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因:目的基因+启动子+终止子+标记基因,方法是采用DNA分子杂交技术。如图。如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状,从而将含有目的基因的细胞筛选出来:生物种类 植物细胞 动物细胞 微生物细胞常用方法 农杆菌转化法 显微注射技术 Ca2+处理法受体细胞 体细胞 受精卵 原核细胞转化过程 将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的DNA→表达 将含有目的基因的表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 Ca2+处理细胞→感受态细胞→重组表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子(3)重组细胞导入受体细胞后。(2)其次还要检测目的基因是否转录出mRNA,方法是用标记的目的基因作探针与mRNA杂交
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