Question

哪些方法可以检测转基因植物中的外源基因2

Answer 1

分析、确定了75个品种的转基因构建成分,为开展转基因检测奠定了基础。

2、不同类型的植物提取基因组DNA的方法略有差异,该研究优化了CTAB、SDS快速提取法,并选择了磁珠吸附试剂盒法,成功提取了适合于PCR反应的植物基因组DNA。

3、以植物内源基因18SrRNA为靶标,设计、优化后筛选出特异性引物和探针,建立了以18SrRNA为目标的检测植物基因组DNA提取质量的PCR与荧光PCR鉴定体系。

4、首次以CaMV35S、FMV启动子、NOS终止子、标记基因NPTII、抗除草剂基因EPSPS、PAT、抗虫基因CryIAb为检测目标,设计、筛选出特异性引物,优化实验参数,建立了转基因植物PCR定性检测方法体系,灵敏度达0。

1﹪。

5、克隆了CaMV35S、FMV启动子、NOS终止子、标记基因NPTII、抗除草剂基因EPSPS、PAT、抗虫基因CryIAb的阳性质粒作为转基因植物检测的阳性对照。

6、于反应体系中引入UNG酶,建立了无污染的荧光PCR扩增体系。

7、首次以FAM荧光素标记探针5端作为发光基团,以TARMA标记探针3端为淬灭基团,以CaMV35S、FMV启动子、NOS终止子、标记基因NPTII、抗除草剂基因EPSPS、PAT、抗虫基因CryIAb为检测目标,设计、筛选出特异性引物和探针,优化实验参数,建立了转基因植物通用性荧光PCR定性检测方法体系。

8、以FAM和TET两种荧光素标记外源基因和内源基因,建立了转基因大豆抗除草剂基因EPSPS和转基因玉米抗虫基因CryIAb的荧光PCR定量检测体系,两体系的灵敏度均达到0。

1﹪以上。

9、首次利用反向PCR技术扩增出华番1号基因组未知DNA序列,并通过DNA测序,利用BLAST软件进行同源性比较,找出载体与基因组整合位点DNA序列。

10、利用荧光PCR技术,设计出特异性引物与探针,优化实验参数,建立了一种灵敏、精确、定量和鉴定华番1号品种特异性的高效检测体系。

这在国内为首次利用整合位点进行转基因植物检测和品种特异性鉴定的方法……