Question

PCR结果呈弥散状是什么原因造成的

我上个星期跑完PCR的产物跑琼脂糖凝胶电泳时，所有样都不出现条带，而是弥散状的，从投拖到尾，而maker却是好的，说明不是电泳的问题，我把所有的酶，buffer,Mg+都换了一遍了还是找不到原因，结果照旧，谁能告诉我这可能是什么原因造成的，小女子感激不尽

Answer 1

退火温度较低导致的非特异性扩增是造成遇到问题的原因。可以通过Touch Down PCR或者梯度PCR摸索最佳退火温度后重新进行PCR。

PCR产物放置过久考虑产物降解；如果是PCR后及时上样，考虑引物特异性较差或者模板不纯（包括降解以及掺有别的DNA序列）

PCR可以被认为是与发生在细胞内的DNA复制过程相似的技术，其结果都是以原来的DNA为模板产生新的互补DNA片段。细胞中DNA的复制是一个非常复杂的过程。参与复制的有多种因素。

扩展资料：

PCR反应五要素：参加PCR反应的物质主要有五种即：引物(PCR引物为DNA片段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+）。

引物有多种设计方法，由PCR在实验中的目的决定，但基本原则相同。PCR所用的酶主要有两种来源：Taq和Pfu，分别来自两种不同的噬热菌。其中Taq扩增效率高但易发生错配。Pfu扩增效率弱但有纠错功能。所以实际使用时根据需要必须做不同的选择。

参考资料来源：百度百科-聚合酶链式反应

Answer 2

1 模板浓度太高了，结果模板不能很好地和引物结合而自结合了
2 镁离子浓度高了，可能buffer里含有镁离子，你又加了一遍
3 单纯的退火温度问题也许不会造成全部弥散，适当提高些就好，一般比推荐温度高2-3度就可以
4 也许你看到的根本就不是扩增产物，你的引物不合适
5 最好给出你目标片段的大小或是范围，再说下你的程序，大家好帮你看看
6 做个肯定能扩出来的东西一起电泳，检查下是不是你的药品或设备有问题
哥哥我能想到就这些了

Answer 3

退火温度较低导致的非特异性扩增是造成你遇到问题的原因。你可以通过Touch Down PCR或者梯度PCR摸索最佳退火温度后重新进行PCR。

Answer 4

1.你的引物是不是特异性不高？
2.延伸时间够不够长，一般是1k--1min？
3.退火温度是否过低？
4.电泳的问题应该不大，重新换个模板试一下。

Answer 5

跑完PCR后，产物最好是当天电泳。时间长了会降解。镁离子、dNTP等这些都会影响PCR结果的，退火温度也很重要，最好优化一下，找到最适退火温度。