酶的特异性鉴定试验
1.了解酶的特异性
2.掌握检查酶特异性的方法及原理
【实验原理】
酶是生物体内一类具有催化功能的蛋白质（传统酶的概念）,即生物催化剂.它与一般催化剂的最主要区别就是具有高度的特异性（专一性）.所谓特异性是指酶对所作用的底物有严格的选择性,即一种酶只能对一种化合物或一类化合物（其结构中具有相同的化学键）起一定的催化作用,而不能对别的物质起催化作用.酶的特异性是酶的特征之一,但各种酶所表现的特异性在程度上有很大差别,又可分为结构特异性和立体异构特异性.
淀粉和蔗糖都是非还原性糖,分别为唾液淀粉酶和蔗糖酶的专一底物.唾液淀粉酶可水解淀粉生成具有还原性的麦芽糖,但不能水解蔗糖；蔗糖酶可水解蔗糖生成具有还原性的葡萄糖和果糖,但不能水解淀粉.
Benedict试剂是含硫酸铜和柠檬酸钠的碳酸钠溶液,可以将还原糖氧化成相应的化合物,同时 Cu2+被还原成Cu+,即蓝色硫酸铜溶液被还原产生砖红色的氧化亚铜沉淀.因此,可用Benedict试剂检查两种酶水解各自的底物所生成产物的还原性,来加深对酶特异性的理解.
【器材及试剂】（一）器材1.恒温水浴锅
2.试管及试管架
3.滤斗
4.吸量管
5.量筒
6.烧杯
7.离心机 （二）试剂1.2%蔗糖
2.1%淀粉 （内含0.3%的NaCl）
3.唾液淀粉酶溶液
先用蒸馏水漱口,然后用洁净试管1支,取唾液（无泡沫）约2ml,蒸馏水20倍稀释,备用.
4.蔗糖酶溶液
取活性干酵母1.0g,置于研钵中,加少量蒸馏水及石英砂研磨提取约10min,再加蒸馏水至总体积约为20ml,过滤或离心,取滤液或上清液备用.
5.Benedict试剂
将无水CuSO4 17.4g溶于100℃热水中,冷后稀释至150ml.另取柠檬酸钠173g及无水Na2CO3 100g放入600ml水中,加热溶解,溶液如有浑浊,过滤,冷后稀释至850ml.最后将CuSO4溶液倾入柠檬酸- Na2CO3溶液中,混匀（此溶液可长期保存）.
【实验步骤】
（一）淀粉酶的特异性
取试管5支,标号,按下表所列的次序操作：试剂试管编号123451%淀粉溶液（ml）1.0—1.0——2%蔗糖溶液（ml）—1.0—1.0—唾液淀粉酶（ml）——1.01.01.0蒸馏水（ml）1.01.0——1.0 各管加完试剂后,放37℃恒温水浴保温10min,然后每管加入Benedict试剂2ml,再放沸水浴5min.观察各管颜色变化,并解释实验结果.
（二）蔗糖酶的特异性
取试管5支,标号,按下表所列的次序操作：试剂试管编号123451%淀粉溶液（ml）1.0—1.0——2%蔗糖溶液（ml）—1.0—1.0—蔗糖酶（ml）——1.01.01.0蒸馏水（ml）1.01.0——1.0 各管加完试剂后,放37℃恒温水浴保温10min,然后每管加入Benedict试剂2ml,再放沸水浴5min.
观察各管颜色变化,并解释实验结果.
【要点提示】
1.蔗糖是典型的非还原糖,若商品中还原糖的含量超过一定的标准,则呈现还原性,这种蔗糖不能使用.一般在实验前要对所用的蔗糖进行检查,至少要用分析纯试剂.
2.由于不同的人或同一个人不同时间采集的唾液内淀粉酶的活性并不相同,有时差别很大,所以唾液的稀释倍数可根据各人的唾液淀粉酶的活性进行调整,一般为20～200倍.
3.制备的蔗糖酶液一般情况下含有少量的还原糖杂质,所以可出现轻度的阳性反应.另外,不纯净的淀粉及加热过程中淀粉的部分降解,也可出现轻度的阳性反应.
4.除了含有淀粉酶外,唾液中还含有少量的麦芽糖酶,可使麦芽糖水解为葡萄糖.
上海敏心
2023-08-27 广告
【实验目的】
1、了解酶的特异性
2、掌握检查酶特异性的方法及原理
【实验原理】
酶是生物体内一类具有催化功能的蛋白质（传统酶的概念），即生物催化剂。它与一般催化剂的最主要区别就是具有高度的特异性（专一性）。
所谓特异性是指酶对所作用的底物有严格的选择性，即一种酶只能对一种化合物或一类化合物（其结构中具有相同的化学键）起一定的催化作用，而不能对别的物质起催化作用。酶的特异性是酶的特征之一，但各种酶所表现的特异性在程度上有很大差别，又可分为结构特异性和立体异构特异性。
淀粉和蔗糖都是非还原性糖，分别为唾液淀粉酶和蔗糖酶的专一底物。唾液淀粉酶可水解淀粉生成具有还原性的麦芽糖，但不能水解蔗糖；蔗糖酶可水解蔗糖生成具有还原性的葡萄糖和果糖，但不能水解淀粉。
Benedict试剂是含硫酸铜和柠檬酸钠的碳酸钠溶液，可以将还原糖氧化成相应的化合物，同时Cu2+被还原成Cu+，即蓝色硫酸铜溶液被还原产生砖红色的氧化亚铜沉淀。因此，可用Benedict试剂检查两种酶水解各自的底物所生成产物的还原性，来加深对酶特异性的理解。
【器材及试剂】
1、仪器：
（1）研钵；
（2）试管：6支；
（3）试管架；
（4）小烧杯；
（5）刻度吸管：1毫升×5，2毫升×1；
（6）漏斗；
（7）电热恒温水浴。
2、试剂：
（1）1%淀粉溶液（含0.3%NaCl）：将1克可溶性淀粉及0.3克氯化钠，混悬于5毫升蒸馏水中，搅动后缓慢倒入沸腾的60毫升蒸馏水中，搅动煮沸1分钟。晾至室温后加水至100毫升，放置于冰箱贮存。
（2）2%蔗糖溶液：蔗糖是典型的非还原糖，若商品蔗糖中还原糖含量超过一定标准，则呈还原性，这种蔗糖不能使用。所以，实验前必须进行检查。本实验用的蔗糖至少应是分析纯的试剂，要现用现配。
（3）淀粉酶液：稀释200倍的新鲜唾液。
（4）蔗糖酶液：取1克新鲜酵母放入研钵中，加少量石英砂和蒸馏水，研磨10分钟左右，用蒸馏水稀释至50毫升，静止片刻再过滤，滤液即为蔗糖酶提取液。
（5）本乃狄（Benedict）试剂：将17.3克硫酸铜溶解于100毫升蒸馏水中。冷却后稀释至150毫升。取柠檬酸钠173克及碳酸钠（Na2CO3·H2O）100克，加水600毫升，加热使之溶解，冷却后，稀释至850毫升。最后把硫酸铜溶液缓缓倾入柠檬酸钠-碳酸钠溶液中，边加边搅拌，如有沉淀可停止。
【操作步骤】
取6支试管编号，按下表操作：
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扩展资料：
酶（enzyme）是由活细胞产生的、对其底物具有高度特异性和高度催化效能的蛋白质或RNA。
酶的催化作用有赖于酶分子的一级结构及空间结构的完整。若酶分子变性或亚基解聚均可导致酶活性丧失。酶属生物大分子，分子质量至少在1万以上，大的可达百万。酶是一类极为重要的生物催化剂（biocatalyst）。
由于酶的作用，生物体内的化学反应在极为温和的条件下也能高效和特异地进行。随着人们对酶分子的结构与功能、酶促反应动力学等研究的深入和发展，逐步形成酶学（enzymology）这一学科。
酶的化学本质是蛋白质（protein）或RNA（RibonucleicAcid），因此它也具有一级、二级、三级，乃至四级结构。
按其分子组成的不同，可分为单纯酶和结合酶。仅含有蛋白质的称为单纯酶；结合酶则由酶蛋白和辅助因子组成。例如，大多数水解酶单纯由蛋白质组成；黄素单核苷酸酶则由酶蛋白和辅助因子组成。结合酶中的酶蛋白为蛋白质部分，辅助因子为非蛋白质部分，只有两者结合成全酶才具有催化活性。
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酶的反应特点：
1、高效性：酶的催化效率比无机催化剂更高，使得反应速率更快；
2、专一性：一种酶只能催化一种或一类底物，如蛋白酶只能催化蛋白质水解成多肽；
3、多样性：酶的种类很多，迄今为止已发现约4000多种酶，在生物体中的酶远远大于这个数量；
4、温和性：是指酶所催化的化学反应一般是在较温和的条件下进行的；
5、活性可调节性：包括抑制剂和激活剂调节、反馈抑制调节、共价修饰调节和变构调节等；
6、易变性：大多数酶是蛋白质，因而会被高温、强酸、强碱等破坏；
7、有些酶的催化性与辅助因子有关；
8、改变化学反应速率，本身几乎不被消耗；
9、只催化已存在的化学反应；
10、能加快化学反应的速度，但酶不能改变化学反应的平衡点，也就是说酶在促进正向反应的同时也以相同的比例促进逆向的反应，所以酶的作用是缩短了到达平衡所需的时间，但平衡常数不变；
11、降低活化能，使化学反应速率加快；
12、与无机催化剂一样，也会出现中毒现象。
参考资料：/baike.baidu.com/item/%E9%85%B6/107742?fr=aladdin"target="_blank"title="百度百科-酶">百度百科-酶
