什么是正向引物和反向引物?
正向引物和反向引物是相对的,通常以一个双链DNA(上面的那条链)的上游结合部位称为正向引物,是从左到右的方向,也就是5-3的方向,而下面那条互补链的下游结合部位称为反向引物。
其方向是从右到左的,因为下面的链的方面从左到右是3-5,从右到左就是5-3了,PCR的扩增的确是一条引物就可以扩增了。
反向引物的存在可以结合互补链,使互补链的扩增方向也是5-3,这样一次就是两条链同时扩增,循环一次就是4条链同时扩增再循环一次就是8条链同时扩增,这样才是所谓的几何级数扩增。
正向合成时延伸到反向引物结合位点时就会停止,同理反向引物也是。
扩展资料:
PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列。因此,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。
因为在同一PCR反应中,是用一个退火温度的,为了保证目的片段两端的引物都能与模板配对互搭,所以在设计引物时,尽量使两个引物的Tm值不要差别太大。
一般引物长度为15~30碱基,扩增片段长度为100~600碱基对。 一般引物序列中G+C含量一般为40%~60%。而且四种碱基的分布最好随机。 同时引物之间也不能有互补性,一般一对引物间不应多于4个连续碱基的互补。
引物确定以后,可以对引物进行必要的修饰,例如可以在引物的5′端加酶切位点序列;标记生物素、荧光素、地高辛等,这对扩增的特异性影响不大。但3′端绝对不能进行任何修饰,因为引物的延伸是从3′端开始的。
还需提醒的是3′端不要终止于密码子的第3位,因为密码子第3位易发生简并,会影响扩增的特异性与效率。
参考资料来源:百度百科——聚合酶链式反应
参考资料来源:百度百科——引物
参考资料来源:百度百科——反向引物
2023-04-12 广告