Question

PCR和电泳问题，请高手指教，不胜感激

我做的小麦微卫星标记，初步筛选引物，SSR引物有1000多对，我的模板浓度以调整到50ng微升，退火温度55度，但是最近做总是不理想，大多数的引物扩不出带，有带也不是很清楚，还不如前几天做得好，引物应该没有问题，因为有师兄用的就很好。扩增体系15微升，应该没有问题，1.5的BUFFER,1.2的Mg，1.2的dNTP,0.15的酶，大连宝生物的产品。
为什么，可能个别印务会扩不出带正常，但是大部分没有带就有问题了，请教各位大侠，不胜感激

Answer 1

请问楼主 你做的是一种模板对多种引物么？如果是的话 那可能就是引物的tm值不同造成的 既然引物没什么问题 那么你可以试试在退火温度上做下调节 降低或者升高一两度 看结果会不会有些好转

Answer 2

降低模板量试试看，不是开玩笑的，偶们院长教的，是真的，有时候模板量降低了，真的有好处的，不要以为越多越好，过多的模板也会抑制PCR扩增的

Answer 3

你之前做的好用吗？
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